成人整装准备果蝇巨纤维染料注射腹侧神经索
Summary
一个<em>在体内</em>成人解剖<em>果蝇</em>腹神经索（VNC）是证明。这种特殊的解剖方法会导致损伤小到VNC允许的高分辨率成像的荧光染料的巨纤维神经元的后续标签。
Abstract
为了分析神经元轴突和树突状的形态，这是必须获得准确的神经元结构的标签。准备以及标记的样品几乎没有组织损伤，使我们能够分析细胞形态和相互比较个别样品，从而使突变异常的识别。
在证明清扫方法的神经系统仍然主要是里面的成人飞。通过背侧切口，腹部和胸部开了，大部分内脏器官都将被删除。只有背侧，腹侧神经线（VNC）和宫颈结缔组织（CVC）的巨型纤维（GFS）1大轴突外露，而大脑含有的GF胞体和树突仍然完整的头2 。在这个准备，最神经的VNC应保持连接到他们的肌肉。
剥离后，细胞内的巨型纤维（GF）用荧光染料填充证明。 CVC GF轴突位于背表面，从而可以很容易地与微分干涉对比（DIC）的光学显微镜下可视化。这使得在此网站与染料的GF轴突注射标签VNC的轴突和他们的终端包括整个的GF。该方法结果可靠和强大的政府飞行服务队的允许填充啶显微镜后，立即进行成像神经元染色。另外，使用的标准的免疫组织化学程序 3适用于高分辨率的共聚焦显微镜，荧光信号可增强。
Protocol
Discussion
没有从果蝇体内提取的神经系统，可以解剖。这有两个好处，第一，夹层导致神经系统的损害不大，并保持连接第二，大多数神经肌肉和感觉器官。表演解剖描述的那样，准备向前伸直政府飞行服务队的染料标记的样品。为方便起见，政府飞行服务队的运动神经元突触后留附着的肌肉。轴突，因此，没有损坏，保持神经元的存活更长的时间。此外，对神经系统的损害是可能扰乱间隙连接功能，从?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
描述该项目是从国家儿童健康和人类发展研究所的支持标记的内容完全是作者的责任，并不一定代表的国家儿童健康和人类发展或研究所的官方意见，赠款数R01HD050725美国国立卫生研究院。我们感谢他们的手稿和视频输入Godenschwege实验室以及芭芭拉Schreader成员。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
|---|---|---|---|
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning | ||
| Dissection Microscope | AmScope | SM-2TZ | |
| Vannas Scissors Superfine | Academic Instruments | VS1023 | |
| Dumont Forceps Dumontstar 55 | Fine Science Tools | 11295-51 | |
| Austerlitz Insect pins | Fine Science Tools | 26002-10 | Ø 0.1mm |
| Borosilicate Glass Electrodes | World Precision Instruments | 1B100F-4 | |
| Vertical Pipette Puller 700c | David Kopf Instruments | Model 700C | |
| Lucifer Yellow CH dilithium salt | Sigma | L0259 | 1% in H2O |
| Fixed Stage Upright Microscope & Camera | Nikon | FN-1 & DS-U2 Camera | |
| Plan Fluor 10X Air Objective | Nikon | CFI Plan Fluor 10X NA 0.3 WD 16mm | |
| Fluor 40X water dipping Objective | Nikon | CFI Fluor 40X W NA 0.80 WD 2.0mm | |
| 3D hydraulic Micromanipulator | Narishige International | Model MW0-3 | |
| Amplifier | Getting Instruments, Inc. | Model 5A |
Referências
- Power, M. E. The thoracico-abdominal nervous system of an adult insect Drosophila melanogaster. J. Comp. Neurol. 88, 347-409 (1948).
- Allen, M. J., Godenschwege, T. A., Tanouye, T. A., Phelan, P. Making an escape: development and function of the Drosophila giant fibre system. Semin. Cell Dev. Biol. 17, 31-41 (2006).
- Boerner, J., Duch, C. Average shape standard atlas for the adult Drosophila ventral nerve cord. J. Comp. Neurol. 518, 2437-2455 (2010).
- Gu, H., O’Dowd, D. K. Cholinergic synaptic transmission in adult Drosophila Kenyon cells in sity. J. Neurosci. 26, 265-272 (2006).
- Boerner, J., Godenschwege, T. A. Application for the Drosophila ventral nerve cord standard in neuronal circuit reconstruction and in-depth analysis of mutant morphology. J. Neurogent. 24, 158-1567 (2010).
- Godenschwege, T. A., Kristiansen, L. V., Uthaman, S. B., Hortsch, M., Murphey, R. K. A conderved role for Drosophila Neuroglian and human L1-CAM in central-synapse formation. Curr. Biol. 16, 12-23 (2006).
- Uthaman, S. B., Godenschwege, T. A., Murphey, R. K. A mechanism distinct from highwire for the Drosophila ubiquitin conjugase bendless in synaptic growth and maturation. J. Neurosci. 28, 8615-8623 (2008).
- Storkebaum, E. Dominant mutations in the tyrosyl-tRNA synthetase gene recapitulate in Drosophila features of human Charcot-Marie-Tooth neuropathy. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 106, 11782-11787 (2009).
- Allen, M. J., Godenschwege, T. A. Electrophysiological recordings from the Drosophila giant fiber system (GFS). Cold Spring Harb. Protoc. 2010, pdb.prot5453-pdb.prot5453 (2010).
- Augustin, H., Allen, M. J., Partridge, L. Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster. J. Vis. Exp. , (2011).
