كله من جبل إعداد الكبار ذبابة الفاكهة الحبل الاعصاب الاماميه للحقن صبغ الألياف العملاق
Summary
و<em> في الجسم الحي</em> تشريح الكبار<em> ذبابة الفاكهة</emويتجلى> الحبل البطني العصب (VNC). هذا الأسلوب تشريح خاص يسبب ضررا قليلا إلى VNC يسمح بوضع العلامات اللاحقة من الخلايا العصبية العملاقة الألياف مع صبغة الفلورسنت لتصوير عالية الدقة.
Abstract
لتحليل مورفولوجيا محواري وشجيري الخلايا العصبية ، فمن الضروري الحصول على العلامات الدقيقة الهياكل العصبية. تحضير عينات المسمى جيدا مع قليل من دون تلف الأنسجة تمكننا من تحليل الخلايا والتشكل لمقارنة العينات الفردية لبعضهم البعض ، مما يسمح بالتالي تحديد الحالات الشاذة متحولة.
في أسلوب أظهر تشريح الجهاز العصبي لا يزال معظمهم داخل يطير الكبار. من خلال شق ظهري ، يتم فتح البطن والصدر ويتم إزالة معظم الأعضاء الداخلية. ويتعرض فقط الجانب الظهري للحبل العصب البطنية (VNC) وسرطان عنق الرحم الضامة (سي) التي تحتوي على محاور عصبية كبيرة من الألياف العملاقة (GFS) 1 ، في حين أن المخ يحتوي على خلايا الجسم والتشعبات GF يبقى 2 في الرأس سليما . وينبغي في هذا التحضير لا تزال تعلق معظم أعصاب VNC لعضلاتهم.
بعد التشريح ، ويتجلى ملء الخلايا من الألياف العملاقة (GF) مع صبغة الفلورسنت. في سي تقع المحاوير GF على السطح الظهري ، وبالتالي يمكن تصور بسهولة تحت المجهر مع النقيض تدخل الفرق (DIC) البصريات. هذا يسمح للحقن المحاوير GF مع صبغة في هذا الموقع لتسمية GF بأكملها بما في ذلك المحاور والمحطات الخاصة في فنك. هذا الأسلوب يؤدي إلى تلطيخ موثوقة وقوية من GFS السماح تصوير الخلايا العصبية على الفور بعد ملء مع epifluorescent المجهر. بدلا من ذلك ، يمكن تعزيز إشارة الفلورسنت القياسية المناعية باستخدام الإجراءات المناسبة للفحص المجهري 3 ارتفاع القرار مبائر.
Protocol
Discussion
يمكن تشريح الجهاز العصبي دون استخراج من الجسم يطير. هذا وقد اثنين من المزايا : أولا ، يسبب ضررا قليلا تشريح الجهاز العصبي ، والثانية ، ومعظم الأعصاب البقاء تعلق على العضلات والحواس. أداء التشريح ، كما هو موضح ، ويعد نموذج لوضع العلامات على التوالي إلى الأمام من صبغ GFS. ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد المشروع وصفها من حيث عدد المنح R01HD050725 من المعهد الوطني لصحة الطفل والتنمية البشرية إلى العلامة المحتوى هو فقط من مسؤولية الكتاب ولا تمثل بالضرورة وجهة النظر الرسمية للمعهد الوطني لصحة الطفل والتنمية البشرية أو المعاهد الوطنية للصحة. نشكر أعضاء المختبر Godenschwege فضلا Schreader باربرا لمساهمتها في مخطوطة والفيديو.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
|---|---|---|---|
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning | ||
| Dissection Microscope | AmScope | SM-2TZ | |
| Vannas Scissors Superfine | Academic Instruments | VS1023 | |
| Dumont Forceps Dumontstar 55 | Fine Science Tools | 11295-51 | |
| Austerlitz Insect pins | Fine Science Tools | 26002-10 | Ø 0.1mm |
| Borosilicate Glass Electrodes | World Precision Instruments | 1B100F-4 | |
| Vertical Pipette Puller 700c | David Kopf Instruments | Model 700C | |
| Lucifer Yellow CH dilithium salt | Sigma | L0259 | 1% in H2O |
| Fixed Stage Upright Microscope & Camera | Nikon | FN-1 & DS-U2 Camera | |
| Plan Fluor 10X Air Objective | Nikon | CFI Plan Fluor 10X NA 0.3 WD 16mm | |
| Fluor 40X water dipping Objective | Nikon | CFI Fluor 40X W NA 0.80 WD 2.0mm | |
| 3D hydraulic Micromanipulator | Narishige International | Model MW0-3 | |
| Amplifier | Getting Instruments, Inc. | Model 5A |
Referências
- Power, M. E. The thoracico-abdominal nervous system of an adult insect Drosophila melanogaster. J. Comp. Neurol. 88, 347-409 (1948).
- Allen, M. J., Godenschwege, T. A., Tanouye, T. A., Phelan, P. Making an escape: development and function of the Drosophila giant fibre system. Semin. Cell Dev. Biol. 17, 31-41 (2006).
- Boerner, J., Duch, C. Average shape standard atlas for the adult Drosophila ventral nerve cord. J. Comp. Neurol. 518, 2437-2455 (2010).
- Gu, H., O’Dowd, D. K. Cholinergic synaptic transmission in adult Drosophila Kenyon cells in sity. J. Neurosci. 26, 265-272 (2006).
- Boerner, J., Godenschwege, T. A. Application for the Drosophila ventral nerve cord standard in neuronal circuit reconstruction and in-depth analysis of mutant morphology. J. Neurogent. 24, 158-1567 (2010).
- Godenschwege, T. A., Kristiansen, L. V., Uthaman, S. B., Hortsch, M., Murphey, R. K. A conderved role for Drosophila Neuroglian and human L1-CAM in central-synapse formation. Curr. Biol. 16, 12-23 (2006).
- Uthaman, S. B., Godenschwege, T. A., Murphey, R. K. A mechanism distinct from highwire for the Drosophila ubiquitin conjugase bendless in synaptic growth and maturation. J. Neurosci. 28, 8615-8623 (2008).
- Storkebaum, E. Dominant mutations in the tyrosyl-tRNA synthetase gene recapitulate in Drosophila features of human Charcot-Marie-Tooth neuropathy. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 106, 11782-11787 (2009).
- Allen, M. J., Godenschwege, T. A. Electrophysiological recordings from the Drosophila giant fiber system (GFS). Cold Spring Harb. Protoc. 2010, pdb.prot5453-pdb.prot5453 (2010).
- Augustin, H., Allen, M. J., Partridge, L. Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster. J. Vis. Exp. , (2011).
