描述一个新的DC抗原特异性T细胞的诱导和扩张的独立方法。基于HLA A2 – Ig的人工抗原提呈细胞(AAPC)加载与HLA – A2限制性肽能够有效地扩大多样化的抗原特异性CTL的。该技术拥有CTL为基础的过继免疫治疗的巨大潜力。
CTL的最佳效应功能发挥的关键作用,在调解对各种细胞内感染和癌症的保护。然而,个人可能会出现抑制免疫微环境,在激活的CTL,其自体的抗原提呈细胞可能倾向于tolerize或anergize抗原特异性CTL。因此,虽然仍处于实验阶段,CTL为基础的过继免疫治疗已经发展成为一个很有前途的治疗各种疾病,如癌症和病毒感染。在最初的实验中,前体外扩增巨细胞病毒(巨细胞病毒)特异性CTL已用于免疫功能低下的异基因骨髓移植患者巨细胞病毒感染的治疗。虽然是很常见的危及生命的巨细胞病毒血症,在这些患者中没有接收病人扩大的CTL发展巨细胞病毒有关的疾病,这意味着抗CMV免疫过继转移的 CTL 1。可喜的成果也被观察到黑色素瘤,并有可能延长向其他类型的癌症2。
虽然有很多方法体外刺激和扩大人类的CTL,目前的办法是限制的成本和技术的限制。例如,目前的黄金标准是基于使用的自体DC。这就要求每一个病人捐出大量的白细胞,也很昂贵,费力。此外,在体外直流扩大CTL的特性详细透露,这些有唯一不理想的效应功能3。
这里我们提出一个高效的AAPC体外扩增人类巨细胞病毒特异性CTL过继免疫治疗(图1)为基础的系统。 AAPC作了耦合细胞大小的磁珠与人类HLA – A2免疫球蛋白二聚体和抗CD28mAb 4。一旦AAPC是,他们可以满载着各种感兴趣的肽,并保持个月的功能。在这份报告中,AAPC加载与巨细胞病毒,PP65(NLVPMVATV)占主导地位的肽。经过培养纯化与AAPC为期一周的健康捐赠者的人类CD8 + CTL,巨细胞病毒特异性CTL可显着增加的特异性高达98%(图2)和放大10,000倍多。如果需要更多的巨细胞病毒特异性CTL,进一步扩大可轻松实现与AAPC重复刺激。表型和功能分析显示,这些扩大的细胞效应记忆体的表型和TNFα和γ干扰素(图3)大量。
AAPC系统,我们在这里描述的是一个有效率的制度,为人类CTL体外对多种抗原扩张。应特别注意在96孔板文化方面所采取的蛋白共轭的质量和均匀分布AAPC和CTL。使用这种方法我们已经能够扩大的CTL,为8周以上,在此期间,我们扩大抗原特异性CTL百万倍 4 。有各种人造的APC系统,利用细胞株或其他无细胞平台 5,但是,根据公布的数据,每个系统都有其独特的外形扩张和特异性方面支持不同的应用。更重要的是,自CTL的质量和数量的重要,我们的系统所产生的巨细胞病毒特异性CTL polyfunctionality预计赋予优异的抗病毒的效率。
The authors have nothing to disclose.
我们要感谢阿龙Selya有益的讨论。这项工作是支持由美国国立卫生研究院授予AI29575,CA108835,AI077097的JS,从约翰霍普金斯疟疾研究所的试验赠款和国防部授予的PC 040972部莫
Reagent | Company | Catalogue number |
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Vacutainer tube (contains heparin) | Becton Dickinson | 367874 |
Human CD8+ T cell isolation kit | Miltenyi | 130-094-156 |
Dynabeads M-450 Epoxy | Invitrogen | 140.11 |
Dynal MPC-1 Magnet | Invitrogen | 120-01D |
Ficoll-Paque Plus | GE healthcare | 17-1440-03 |
RPMI medium 1640 | Gibco | 11875 |
HLA-A2-Ig dimer X | Becton Dickinson | 551263 |
iTAgMHC tetramer (HLA-A2-CMV)-PE | Beckman Coulter | T20099 |
Falcon clear 96-well Microtest plate | Becton Dickinson | 353077 |
Rat anti-mouse IgG2a-FITC | Becton Dickinson | 553390 |
Goat anti-mouse IgG1-PE | Invitrogen | P21129 |
Human serum type AB | Atlanta biologicals | S40110 |
Mouse anti-human CD8a-FITC | Sigma-Aldrich | F0772 |
Mouse anti-human CD8a-APC | Becton Dickinson | 340684 |
Mouse anti-human IFNγ-FITC | Becton Dickinson | 340449 |
Mouse anti-human TNFα-PE | Becton Dickinson | 340512 |