एचएलए पुलिस महानिरीक्षक के आधार पर कुशल के लिए कृत्रिम प्रतिजन कोशिकाओं पूर्व vivo मानव सीटीएल का विस्तार
Summary
प्रेरण और प्रतिजन विशेष टी कोशिकाओं के विस्तार के लिए एक नया डीसी स्वतंत्र विधि वर्णित है. एचएलए-A2 पुलिस महानिरीक्षक आधारित कृत्रिम एंटीजन पेश कोशिकाओं (aAPC) एचएलए-A2 प्रतिबंधित करने के लिए कुशलतापूर्वक विविध प्रतिजन विशिष्टता के सीटीएल विस्तार पेप्टाइड्स के साथ भरी हुई हैं. इस तकनीक सीटीएल आधारित दत्तक immunotherapy के लिए महान क्षमता रखती है.
Abstract
CTL with optimal effector function play critical roles in mediating protection against various intracellular infections and cancer. However, individuals may exhibit suppressive immune microenvironment and, in contrast to activating CTL, their autologous antigen presenting cells may tend to tolerize or anergize antigen specific CTL. As a result, although still in the experimental phase, CTL-based adoptive immunotherapy has evolved to become a promising treatment for various diseases such as cancer and virus infections. In initial experiments ex vivo expanded CMV (cytomegalovirus) specific CTL have been used for treatment of CMV infection in immunocompromised allogeneic bone marrow transplant patients. While it is common to have life-threatening CMV viremia in these patients, none of the patients receiving expanded CTL develop CMV related illness, implying the anti-CMV immunity is established by the adoptively transferred CTL1. Promising results have also been observed for melanoma and may be extended to other types of cancer2.
While there are many ways to ex vivo stimulate and expand human CTL, current approaches are restricted by the cost and technical limitations. For example, the current gold standard is based on the use of autologous DC. This requires each patient to donate a significant number of leukocytes and is also very expensive and laborious. Moreover, detailed in vitro characterization of DC expanded CTL has revealed that these have only suboptimal effector function 3.
Here we present a highly efficient aAPC based system for ex vivo expansion of human CMV specific CTL for adoptive immunotherapy (Figure 1). The aAPC were made by coupling cell sized magnetic beads with human HLA-A2-Ig dimer and anti-CD28mAb4. Once aAPC are made, they can be loaded with various peptides of interest, and remain functional for months. In this report, aAPC were loaded with a dominant peptide from CMV, pp65 (NLVPMVATV). After culturing purified human CD8+ CTL from a healthy donor with aAPC for one week, CMV specific CTL can be increased dramatically in specificity up to 98% (Figure 2) and amplified more than 10,000 fold. If more CMV-specific CTL are required, further expansion can be easily achieved by repetitive stimulation with aAPC. Phenotypic and functional characterization shows these expanded cells have an effector-memory phenotype and make significant amounts of both TNFα and IFNγ (Figure 3).
Protocol
Discussion
aAPC प्रणाली हम यहाँ वर्णन प्रतिजनों की एक किस्म के खिलाफ मानव सीटीएल के पूर्व vivo विस्तार के लिए एक कुशल प्रणाली है. विशेष देखभाल 96 अच्छी तरह से थाली संस्कृति में प्रोटीन संयुग्मन की गुणवत्ता और aAPC और सीटीएल का भी वितरण संबंध के साथ लिया जाना चाहिए. हम सीटीएल का विस्तार करने में सक्षम से अधिक 8 सप्ताह के लिए किया गया है, जिसके दौरान हम प्रतिजन विशेष सीटीएल विस्तार एक लाख चार गुना करने के लिए इस दृष्टिकोण का उपयोग . विभिन्न कृत्रिम APC सिस्टम सेल लाइनों या अन्य अकोशिकीय प्लेटफार्मों 5 का उपयोग किया गया है, लेकिन प्रकाशित डेटा हर प्रणाली अपने विस्तार और विशिष्टता के लिए संबंध में विभिन्न अनुप्रयोगों के समर्थन के साथ एक अद्वितीय प्रोफ़ाइल है के अनुसार. महत्वपूर्ण बात है, के बाद से सीटीएल की गुणवत्ता के रूप में मात्रा के रूप में में महत्वपूर्ण है, सीएमवी विशिष्ट हमारी प्रणाली द्वारा उत्पन्न सीटीएल के polyfunctionality से बेहतर विरोधी वायरल दक्षता प्रदान की उम्मीद कर रहे हैं.
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम हारून Selya उपयोगी चर्चा के लिए धन्यवाद देना चाहूंगा. यह काम एनआईएच AI29575 अनुदान, CA108835, AI077097 जे एस, जॉन्स हॉपकिंस मलेरिया अनुसंधान संस्थान से एक पायलट अनुदान और एमओ के लिए रक्षा अनुदान पीसी 040972 विभाग द्वारा समर्थित किया गया
Materials
| Reagent | Company | Catalogue number |
|---|---|---|
| Vacutainer tube (contains heparin) | Becton Dickinson | 367874 |
| Human CD8+ T cell isolation kit | Miltenyi | 130-094-156 |
| Dynabeads M-450 Epoxy | Invitrogen | 140.11 |
| Dynal MPC-1 Magnet | Invitrogen | 120-01D |
| Ficoll-Paque Plus | GE healthcare | 17-1440-03 |
| RPMI medium 1640 | Gibco | 11875 |
| HLA-A2-Ig dimer X | Becton Dickinson | 551263 |
| iTAgMHC tetramer (HLA-A2-CMV)-PE | Beckman Coulter | T20099 |
| Falcon clear 96-well Microtest plate | Becton Dickinson | 353077 |
| Rat anti-mouse IgG2a-FITC | Becton Dickinson | 553390 |
| Goat anti-mouse IgG1-PE | Invitrogen | P21129 |
| Human serum type AB | Atlanta biologicals | S40110 |
| Mouse anti-human CD8a-FITC | Sigma-Aldrich | F0772 |
| Mouse anti-human CD8a-APC | Becton Dickinson | 340684 |
| Mouse anti-human IFNγ-FITC | Becton Dickinson | 340449 |
| Mouse anti-human TNFα-PE | Becton Dickinson | 340512 |
Referências
- Walter, E. A. Reconstitution of cellular immunity against cytomegalovirus in recipients of allogeneic bone marrow by transfer of T-cell clones from the donor. N Engl J Med. 333, 1038-1038 (1995).
- Rosenberg, S. A. Adoptive cell transfer: a clinical path to effective cancer immunotherapy. Nat Rev Cancer. 8, 3669-3669 (2008).
- Oelke, M. Ex vivo induction and expansion of antigen-specific cytotoxic T cells by HLA-Ig-coated artificial antigen-presenting cells. Nat Med. 9, 619-619 (2003).
- Oelke, M. Artificial antigen-presenting cells: artificial solution for real diseases. Trends Mol Med. 11, 412-412 (2005).
