使用微量的生物规格的纳米分光光度计核酸和蛋白的浓度测定

1。 DNA定量的程序打开仪器。 BioSpec纳米软件从PC桌面上打开。 点击简单核酸双链DNA标签（图1）。 该软件将建立与仪器的通信和运行初始化序列。这验证，该仪器是按规范进行。 选择0.7或0.2毫米的光程滑块。这种选择的光程，所有的计算都基于所选择的路径长度。 BioSpec纳米软件，请点击设置Autowiping设置下一步。选择1或2。 加入2μL（0.7毫米）H 2 O或底座上的缓冲区。 点击空白的空白测量或F6。每次选择一个新的光程是要记录一个空白。 加入2μL的样品基座上。 单击“开始在软件或按下仪器上的启动按钮。上面的窗口移动，使样品液滴的接触。氙弧灯可以观察到。 同一样品重复3次，以确定可重复性。 所有的数据记录保存。芽文件。 要保存为PDF或CSV文件。，单击“保存PDF / CSV或F9键。结果也可以保存为。csv文件，使用适当的选择“保存”选项卡。 2。蛋白质定量议定书“ 选择蛋白定量选项卡（图2）。 输入消光系数E280，如果知道的话。 如果不知道E280计算使用e280Calc。 选择0.7或0.2毫米的光程滑块。 点击安装Autowiping设置。选择2个或以上。 移取3μL（0.2毫米）H 2 O或底座上的缓冲。 点击空白的空白测量或F6。 移取3μL蛋白质样品基座。 单击“开始在软件或按下仪器上的启动按钮。 同一样品重复3次，以确定可重复性。 记录所有的数据将被保存为。芽文件要保存为PDF或CSV文件。，单击“保存PDF / CSV或F9键。 3。代表性的成果： 1。 DNA定量结果图3显示了一个典型的双链DNA样本的测量数据。也显示浓度和OD 260/280比值计算。图4包含DNA定量的测试结果的重复性。在图3和图4显示了结果的数据是非常明显低的相对标准偏差为0.26％重复性。 注1： DNA定量不准确，可能会出现缓冲液成分的存在，这可能在紫外区的吸收。也有必要使用一个同质的样品溶液。由于吸管样本量只有1-2微升，准确卷小心吹打没有出台任何气泡是必需的。 2。蛋白质定量结果图5表示蛋白质BSA浓度的分析。 μg/ mL的蛋白浓度是基于E280价值。图6显示了可重复性的分析。 BioSpec纳米措施浓度精确 – 不仅对DNA也为蛋白质，这是显而易见的，相对标准偏差为0.51％的。 注2：蛋白质浓度的影响因素精确的蛋白浓度测定是可行的，当有不稳定的最低pH值，缓冲液，温度，或添加剂造成的影​​响。大多数纯化的蛋白质经过加工的各个步骤，因此它是可能的，该蛋白可能包含表面活性剂或其他添加剂，可能会干扰与液滴的形成。对于这样的样品，用5毫米光程的石英细胞是强烈建议。 图1双链DNA定量的分析物的选择窗口。 图2分析物非标记的蛋白质定量选择窗口。 DNA定量有代表性的数据图3。 图4。重复性DNA定量数据蛋白质定量的有代表性的数据图5 。 <img src="/files/ftp_upload/2699/2699fig6.jpg"alt ="“图6”/"> 图6。蛋白质定量的重复性数据