Summary

出生後の脳における神経細胞の移動の高分解能タイムラプスイメージングのための器官型スライスアッセイ

Published: December 11, 2010
doi:

Summary

このプロトコルは、吻側渡り鳥ストリームにおける出生後の脳および神経芽細胞の遊走の高解像度のタイムラプスイメージングに最適化された器官スライスのアッセイを説明します。

Abstract

既存の神経回路に前駆細胞、神経芽細胞の遊走、だけでなく、新たな神経細胞の分化と統合の増殖:出生後の脳における神経新生は、3つの生物学的事象のメンテナンスに依存します。嗅球における出生後の神経新生のために、これらのイベントは3つの解剖学的に別個のドメイン内で分離されています:増殖は主に神経芽細胞は吻側渡り鳥ストリーム(RMS)を横断し、新しい神経細胞が分化し、移行、側脳室の上衣ゾーン(SEZ)で発生嗅球(OB)内に統合する。三つのドメインは、はっきりと生物学的事象の各々を調節する、細胞の分子、および生理学的メカニズムを研究する理想的なプラットフォームとして機能する。このホワイトペーパーでは、細胞外の条件が密接に神経芽を移行するための生体内環境で模倣した生後脳組織に最適化された器官スライスアッセイを、説明しています。私たちは、アッセイは、RMS内神経芽細胞の、均一な指向、そしてスピーディな動きを提供することを示している。このアッセイは、異なる遺伝的背景の上にマウスからのクロス移植のアプローチを利用することにより、ニューロン移動の細胞自律的で、非自律的規制の研究のために非常に適したものとなる。

Protocol

I.手続次のような手法は、滅菌のツールを使用して、層流フードで、無菌条件下で実行する必要があります。 器官型スライス用ガラスボトムディッシュの準備料理は、無菌環境で製造し、滅菌のツールを使用している必要があります。 スライス培地の150μLドロップは(レシピを参照)培地中の気泡を避けるために注意して皿のガラス底?…

Discussion

RMSの神経細胞の移動は、嗅球1の出生後の神経新生の重要なコンポーネントです。 RMSを介しての移行は、脳の表面への接平面で発生します。接線方向に移行する神経芽細胞が放射状にその前駆細胞のソースの場所だけでなく、彼らの最終的な神経の製品1、2、3の分岐運命に基づいて細胞の移行とは別個のものである。出生後のRMSでの接線方向に移行し細胞の比較的純粋な人口…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

我々はビデオでプロトコルを語るためのダンマホーターに感謝。この作品は、NIHのグラント5R01NS062182、老化研究のためのアメリカ連合からの助成金、およびHTGに授与機関の資金によってサポートされています。

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Jacquet, B. V., Ruckart, P., Ghashghaei, H. T. An Organotypic Slice Assay for High-Resolution Time-Lapse Imaging of Neuronal Migration in the Postnatal Brain. J. Vis. Exp. (46), e2486, doi:10.3791/2486 (2010).

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