Medição espacial da pressão do fluido intersticial do tumor: um método para medir a pressão do fluido intersticial

1. Medidas Espaciais da Pressão do Fluido Intersticial do Tumor

1. Para medir o IFP conecte a agulha espinhal de 25 G ao transdutor de pressão e ao sistema de aquisição ifp através de 50 cm de tubos de polietileno PE20. Lave todo o sistema com uma solução de sulfato/soro fisiológico de heparina (1:10). Esterilize a agulha com 70% de isopropílico antes de usar.
2. Ligue o sistema de aquisição e inicie o software de aquisição IFP e carregue os arquivos de configurações para calibrar o sistema para adquirir medições IFP em mmHg. Clique no botão de aquisição para coletar continuamente dados IFP.
3. Realizar medições de IFP entre 48 e 72 horas pós-injeção de lipossomos ct (isso corresponde ao tempo aproximado de acúmulo de pico dos lipossomos ct-lipossomos no tumor), utilizando o método descrito.
   1. Use a bomba de seringa para injetar um bolus de lipossomos ct-liposs em uma concentração de 400 mg de iodo kg^-1. Ajuste a bomba para injetar um volume de aproximadamente 150 μl (assumindo um mouse de 25 g). Pressione o botão 'iniciar' na bomba para injetar. Lave manualmente o cateter com 50 μl de soro fisiológico (o dobro do volume do cateter) para garantir que toda a quantidade do agente tenha sido injetada e o cateter esteja limpo.
      Conecte a agulha IFP ao robô CT-IFP.
4. Realize as varreduras de calibração para alinhar os sistemas de coordenadas do robô CT-IFP e do scanner de tomografia computadorizada. Adicione o acessório de marcador fiducial ao robô CT-IFP e realize uma tomografia volumostrica de quatro volumes com o marcador fiduciário em quatro posições diferentes.
   1. Inicie o software do controlador robô CT-IFP, inicie o robô e mova o robô para as três posições, entrando nas posições de alvo x,y,z e clicando no botão 'go'.
   2. Faça uma tomografia nas seguintes coordenadas x,y,z: (1) 0,0,0; (2) -10,0,0; (3) 0,7,0; e (4) 0,0,10. Selecione uma varredura de 90 kV, 10 mA, 16 segundos usando o software ct-scanner e pressione 'Iniciar' para iniciar a varredura. Reconstrua o exame como descrito. Realize uma varredura DCE-CT configurando a bomba de seringa para injetar um volume de 100 μl do iohexol livre misturado com soro fisiológico (proporção de 9:1 por volume).
      1. No console ct-scanner selecione a varredura dinâmica de 5 minutos que usa uma configuração de energia de raios-x de 80 kV, uma energia de tubo de 90mA, e captura 416 projeções de imagem a cada segundo para os primeiros 30 segundos e seguida por uma aquisição a cada 10 segundos. Capture 5 segundos de dados DCE-CT e pressione o botão de partida na bomba de injeção.
      2. Após a tomografia computadorizada, realize uma microcografia anatômica volumosa.
5. Inicie o software de alinhamento do robô CT-IFP. Clique no botão 'adicionar' carregado na região 'Dados de Registro' e selecione as quatro varreduras de cadastro reconstruídas obtidas em 1.3 e clique em 'abrir'.
   NOTA: A localização do pixel do marcador fiduciário será automaticamente inserida no software.
   1. Clique no botão 'Calcular transformar' e clique no botão 'Aplicar transformar'. Isso gera dados de alinhamento que serão usados para converter o sistema de coordenadas do robô CT-IFP para o sistema de coordenadas do scanner ct. Após a calibração ser concluída, conecte a plataforma animal ao robô CT-IFP.
6. Anestesiar cada rato usando 2% de isoflurano misturado com ar médico ou oxigênio e confirmar beliscando o dedo do dedo e não observando nenhuma reação. Imobilize o animal na plataforma robô CT-IFP e posicione o mouse de tal forma que o tumor seja acessível ao sistema robô CT-IFP. Imobilize o tumor usando fita de tal forma que não se mova durante a inserção da agulha IFP.
7. Realize uma microcâmica anatômica antes de inserir a agulha IFP. Reconstrua os dados da TC utilizando as etapas descritas em 1.2.
8. Carregue os dados ct de inserção pré-agulha no software de alinhamento do robô CT-IFP. Ajuste a janela e o nível para visualizar o tumor. Clique na borda do tumor em qualquer imagem e clique em um segundo local de aro.
   NOTA: O software calculará uma série de posições ao longo de uma linha linear entre as duas posições. Observe as coordenadas x, y e z para uma série de 5 a 8 posições espaçadas uniformemente da lista.
9. Prepare o sistema IFP lavando a agulha com solução salina de heparina antes da inserção.
10. Digite as primeiras posições de agulha pré-determinadas no x,y,z, no software de controle do robô CT-IFP e pressione o botão 'go' para mover o robô para a posição desejada. Clique no botão 'Inserir agulha' para inserir a agulha no tecido.
    1. Depois de inserir a agulha, garanta uma boa comunicação de fluido entre a agulha IFP e o tecido, beliscando e liberando a tubulação PE20, observando que a medição ifp aumenta e retorna ao valor pré-beliscado no software de aquisição IFP. Rejeite medidas que não retornem à linha de base.
11. Adquira uma tomografia computadorizada anatômica com a agulha inserida e clique no botão 'Retrate agulha' no software de controle do robô CT-IFP para retirar a agulha do tecido. Rejeite quaisquer medidas IFP em que o valor IFP não retorne ao valor de inserção pré-agulha após a retirada da agulha. Isso significa que a agulha pode ter sido entupida durante a medição. Repita as etapas 1.8 a 1.10 para cada posição da agulha.
12. Determine a posição da agulha dentro do volume do tumor calculando as posições x, y e z da porta da agulha em relação ao centro da massa do volume do tumor, conforme identificado na tomografia volumosa pós-inserção da agulha.
13. Devolva os animais para sua gaiola depois que todas as medidas estiverem completas. Não deixe os animais sozinhos, e tome cuidado para observá-los até que a consciência seja recuperada e eles sejam capazes de manter a recumbência severa.