Transduksjon for å merke PDX tumorceller: Introdusere lentivirus som uttrykker fluorescerende markør i tumorcellen In Vitro

Published: April 30, 2023

Abstract

Kilde: Hanna, C., et al. Merking av brystkreft pasientavledede Xenografts med sporbare reportere for tumorvekst og metastasestudier. J. Vis. Utt. (2016).

Følgende video beskriver en teknikk for transduksjon for å merke (pasientavledede xenografter) PDX tumorceller, som brukes til å introdusere lentivirus som uttrykker grønt fluorescerende protein og luciferase reportere i tumorcellen in vitro.

Protocol

1. Transduksjon av PDX-avledede tumorceller Sentrifuge dissosierte tumorceller ved 300 g x 5 min og resuspend i 2 ml mammosphere media. Tell levedyktige celler ved hjelp av trypan blå ekskludering (Resuspend fordøyde celler i 5 ml vaskebuffer og telle både levedyktige og ikke-levedyktige celler ved hjelp av trypan blå ekskludering. Bland kort 50 μl celler og 50 μl trypan blå og tell trypan-blå unntatt celler ved hjelp av et hemocytometer). Forbered 10 ml mammosfæremedier som inneholder 8 μg/…

Representative Results

Figur 1: Spore transduksjonseffektivitet i dissosierte PDX-celler. A) PDX-dissosierte celler beriket for humane epitelceller (Lin + uttømming) 24 timer etter transduksjon med pSIH1-H1-copGFP-T2A-puro lentivirale partikler. B) PDX-dissosierte celler fra et eget eksperiment, uten epitelcelleberikelse, 72 timer etter transduksjon med pHAGE-EF1aL-luciferase-UBC-GFP-W. Begge panelene viser …

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Materials

DMEM/F12 (1:1) Hyclone SH30023.01
bFGF BD Biosciences 354060
EGF BD Biosciences 354001
Heparin Sigma H4784
B27 Gibco/Thermo Fisher 17504-44
Anti-fungi-antibiotics Hyclone SV30010
HBSS Red Ca2+/Mg2+ free Hyclone SH30031.02
Hepes
Cultrex Cultrex 3433-005-01 Basement Matrix Extract (BME)
30 °C shaker NewBrunswick Scientific CO. INC Series 25 Incubator Shaker

Play Video

Citar este artigo
Transduction to Label PDX Tumor Cells: Introducing Lentivirus Expressing Fluorescent Marker into the Tumor Cell In Vitro. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20214, doi: (2023).

View Video