O vídeo a seguir descreve uma técnica de transdução para rotular (xenoenxertos derivados do paciente) células tumorais PDX, que é usada para introduzir lentivírus expressando proteína verde-fluorescente e repórteres de luciferase na célula tumoral in vitro.
Protocol
1. Transdução de células tumorais derivadas do PDX Centrífuga dissociada células tumorais a 300 g x 5 min e resuspend em mídia mammosfera de 2 ml. Conte células viáveis usando exclusão azul trypan (Resuspend células digeridas em tampão de lavagem de 5 ml e conte células viáveis e não viáveis usando exclusão azul trypan. Resumidamente, misture 50 μl de células e 50 μl de azul trypan e conte células de exceção trypan-azul usando um hemótmetro). Prepare 10 ml de mídia de mammosfer…
Representative Results
Figura 1: Rastreamento da Eficiência de Transdução em Células PDX Dissociadas. A) Células dissociadas por PDX enriquecidas para células epiteliais humanas (esgotamento de Lin+) 24 horas após a transdução com partículas lentiviras pSIH1-H1-copGFP-T2A-puro. B) Células dissociadas pDX de um experimento separado, sem enriquecimento celular epitelial, 72 horas após a transdução…
Transduction to Label PDX Tumor Cells: Introducing Lentivirus Expressing Fluorescent Marker into the Tumor Cell In Vitro. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20214, doi: (2023).