התמרת תווית PDX תאים סרטניים: היכרות Lentivirus הבעת סמן פלואורסצנטי לתוך תא הגידול במבחנה
Published: April 30, 2023
Abstract
מקור: חנה, ג’, ואח ‘. תיוג של קסנוגרפטים שמקורם בסרטן השד עם כתבים למעקב עבור גידולים ומחקרי גרורות. ג’יי ויס אקספ. (2016).
הסרטון הבא מתאר טכניקה של התמרה כדי לתייג (קסנוגרפטים שמקורם בחולה) תאים סרטניים PDX, אשר משמש להחדרת lentivirus המבטא חלבון פלואורסצנטי ירוק וכתבי לוציפראז לתוך תא הגידול במבחנה.
Protocol
1. התמרות של תאים סרטניים שמקורם ב- PDX תאי גידול מנותקים צנטריפוגה ב 300 גרם x 5 דקות ו resuspend ב 2 מיליליטר ממוספרה מדיה. ספירת תאים בני קיימא באמצעות אי הכללה כחולה trypan (Resuspend תאים מתעכלים במאגר לשטוף 5 מ”ל ולספור תאים קיימא ולא קיימא באמצעות אי הכללה כחול trypan. בקצרה, לערבב 50 μl של תאים ו 50 μl של ?…
Representative Results
איור 1: מעקב אחר יעילות התמרה בתאי PDX מנותקים. A) תאים ניתוק PDX מועשר עבור תאי אפיתל אנושיים (לין + דלדול) 24 שעות לאחר התמרה עם pSIH1-H1-copGFP-T2A-puro חלקיקים lentiviral. ב) תאים ניתוק PDX מניסוי נפרד, ללא העשרת תאי אפיתל, 72 שעות לאחר התמר…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| DMEM/F12 (1:1) | Hyclone | SH30023.01 | |
| bFGF | BD Biosciences | 354060 | |
| EGF | BD Biosciences | 354001 | |
| Heparin | Sigma | H4784 | |
| B27 | Gibco/Thermo Fisher | 17504-44 | |
| Anti-fungi-antibiotics | Hyclone | SV30010 | |
| HBSS Red Ca2+/Mg2+ free | Hyclone | SH30031.02 | |
| Hepes | |||
| Cultrex | Cultrex | 3433-005-01 | Basement Matrix Extract (BME) |
| 30 °C shaker | NewBrunswick Scientific CO. INC | Series 25 Incubator Shaker |
Citar este artigo
Transduction to Label PDX Tumor Cells: Introducing Lentivirus Expressing Fluorescent Marker into the Tumor Cell In Vitro. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20214, doi: (2023).