Transduktion til Label PDX Tumor Cells: Introduktion Lentivirus Udtrykke Fluorescerende Marker i Tumor Cell In Vitro
Published: April 30, 2023
Abstract
Kilde: Hanna, C., et al. Mærkning af brystkræft Patient-afledte Xenografts med sporbare journalister for tumor vækst og metastaser Undersøgelser. J. Vis. Exp. (2016).
Følgende video beskriver en teknik til transduktion til etiket (patient-afledte xenografts) PDX tumorceller, som bruges til at indføre lentivirus udtrykke grøn-fluorescerende protein og luciferase reportere i tumor celle in vitro.
Protocol
1. Transduktion af PDX-afledte tumorceller Centrifuge dissociated tumorceller på 300 g x 5 min og genbruges i 2 ml mammosphere medier. Tælle levedygtige celler ved hjælp af trypan blå udelukkelse (Resuspend fordøjet celler i 5 ml vask buffer og tælle både levedygtige og ikke-levedygtige celler ved hjælp af trypan blå udelukkelse. Kort, bland 50 μl af celler og 50 μl trypan blå og tælle trypan-blå eksklusive celler ved hjælp af en hæmocytometer). Der fremstilles 10 ml mammosfæremedier …
Representative Results
Figur 1: Sporing af transduktionseffektivitet i dissociated PDX-celler. A) PDX-dissociated celler beriget til humane epitelceller (Lin + depletion) 24 timer efter transduktion med pSIH1-H1-copGFP-T2A-puro lentivirale partikler. B) PDX-dissocierede celler fra et separat forsøg uden epitelcelleberigelse, 72 timer efter transduktion med pHAGE-EF1aL-luciferase-UBC-GFP-W. Begge paneler vise…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| DMEM/F12 (1:1) | Hyclone | SH30023.01 | |
| bFGF | BD Biosciences | 354060 | |
| EGF | BD Biosciences | 354001 | |
| Heparin | Sigma | H4784 | |
| B27 | Gibco/Thermo Fisher | 17504-44 | |
| Anti-fungi-antibiotics | Hyclone | SV30010 | |
| HBSS Red Ca2+/Mg2+ free | Hyclone | SH30031.02 | |
| Hepes | |||
| Cultrex | Cultrex | 3433-005-01 | Basement Matrix Extract (BME) |
| 30 °C shaker | NewBrunswick Scientific CO. INC | Series 25 Incubator Shaker |
Citar este artigo
Transduction to Label PDX Tumor Cells: Introducing Lentivirus Expressing Fluorescent Marker into the Tumor Cell In Vitro. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20214, doi: (2023).