Disección de la glándula linfática larvaria: Aislar el órgano productor de hemocitos de Drosophila
Published: April 30, 2023
Abstract
Fuente: Reimels, T. A. y Pfleger, C.M. Métodos para examinar la glándula linfática y los hemocitos en larvas de Drosophila. J. Vis. (2016).
Este video describe la glándula linfática Drosophila —el sitio primario de la hematopoyesis en la larva de mosca— y muestra un protocolo de ejemplo para diseccionar y montar el órgano para la inmunohistoquímica y las imágenes fluorescentes.
Protocol
Este protocolo es un extracto de Reimels y Pfleger, Methods to Examine the Lymph Gland and Hemocytes in Drosophila Larvae, J. Vis. Exp. (2016). 1. Inmunohistoquímica de la glándula linfática larvaria NOTA: La glándula linfática se encuentra aproximadamente a un tercio de longitud del extremo anterior de una larva ligeramente por debajo del cerebro en el lado dorsal. (Véase la flecha en la Figur…
Representative Results
Figura 1: Melanización de celda de cristal vivo. A) Las larvas se colocaron individualmente en tubos PCR antes del calentamiento. Las flechas rojas indican larvas que no están en la parte inferior de los tubos. B) Un patrón típico de melanización de células cristalinas después del calentamiento, que a veces revela la glándula linfática (flecha; lado dorsal mostrado, ante…
Materials
| PBS tablets | MP Biomedicals | 2810305 | |
| dissecting dish | Corning | 7220-85 | |
| microcentrifuge tube | Denville | C2170 | |
| silicone dissecting pad, made from Sylgard 184 kit | Krayden (distributed through Fisher) | NC9644388 (Fisher catalog number) | Made in petri dish by mixing components of Sylgard elastomer kit according to manufacturer instructions. |
| stereomicroscope | Morrell Instruments (Nikon distributor) | mna42000, mma36300 | Nikon models SMZ1000 and SMZ645 |
| tissue wipe | VWR | 82003-820 | |
| forceps | Electron Microscopy Sciences | 72700-DZ | |
| p200 pipette | Eppendorf | 3120000054 | |
| formaldehyde | Fisher | BP531-500 | |
| Triton | Fisher | BP151-500 | |
| Tween 20 | Fisher | BP337-500 | |
| bovine serum albumin | Rocky Mountain Biologicals | BSA-BSH-01K | |
| normal goat serum | Sigma | G9023-10ML | |
| normal donkey serum | Sigma | D9663-10ML | |
| 200 proof ethanol | VWR | V1001 | |
| N-propyl gallate | MP Biomedicals | 102747 | |
| glycerol | VWR | EM-4750 | |
| DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole) | Fisher | 62248 | |
| microscope cover glass, 18 mm circular | Fisher | 12-545-100 | |
| glass microscope slides | Fisher | 22-034-980 | |
| 24-well plate | Corning | 351147 | |
| disposable transfer pipet | Fisher | 13-711-9AM | |
| fluorescence microscope | Zeiss | Axio Imager.Z1 |
Citar este artigo
Larval Lymph Gland Dissection: Isolating the Drosophila Hemocyte-Producing Organ. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20117, doi: (2023).