드로소필라 신경 근육 정션 (NMJ) 정량화: 시냅스 형태와 기능을 평가하는 방법
Published: April 30, 2023
Abstract
출처: Castells-Nobau, A., 외. Drosophila 신경 근육 정션 형태학의 높은 처리량 및 다중 파라메트릭 정량화를 위한 두 개의 알고리즘. J. 비스 익스펙. (2017).
Drosophila 신경 근육 접합 (NMJ) 시 냅 스의 형태와 기능을 연구 하는 모델로 사용 됩니다. 이 비디오는 연구원이 NMJ의 특성화를 정량화하는 중요한 특징을 설명합니다. 예제 프로토콜은 정량화를 자동으로 수행할 수 있는 소프트웨어를 보여 줍니다.
Protocol
이 프로토콜은 Castells-Nobau 등에서발췌한 것으로, Drosophila N유로근육 정션 형태학의 고처리량 및 다중 파라메트릭 정량화를 위한 두 가지 알고리즘, J. Vis. Exp. (2017). 1. 이미지 처리 전에 요구 사항 이전에 설명한 대로 세 번째 인스타 방황 애벌레(L3)의 드로소필라 오픈 북 준비를 수행하십시오. “Drosophila NMJ Morphometrics”와 분석을 위해 Brp?…
Representative Results
그림 1: 부적절한 매크로 세분화 결과의 예입니다. “Drosophila NMJ Morphometrics” 또는”Drosophila NMJ 부톤 모포메트릭”을 실행 한 후 결과 이미지. 시냅스 단말의 일부는 노란색윤곽선(A)에포함되지 않습니다. 배경의 일부는 노란색윤곽선(B)에의해 시냅스 단자안에 포함된다. 파란색 골격 선은 …
Materials
| Immunostaining | Dilution | ||
| Mouse anti-discs large 1 | Developmental Studies Hybridoma Bank | AFFN-DLG1-4D6 | 1/25 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Rabbit anti-horseradish peroxidase | Jackson IR | 323-005-021 | 1/500 |
| Rabbit anti-Synaptotagmin | Gift from Hugo Bellen | Jan-00 | |
| Mouse anti-Cysteine string protein | Developmental Studies Hybridoma Bank | DCSP-1(ab49) | 1/10 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Mouse anti-Bruchpilot | Developmental Studies Hybridoma Bank | nc82 | Jan-50 |
| Goat anti-mouse Alexa Fluor 488 | Life technologies | A11029 | 1/200 |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 568 | Life technologies | A11011 | 1/500 |
| Zenon Alexa Fluor 568 Mouse IgG1 Labeling Kit | ThermoFisher | Z25006 | |
| ProLong Gold Antifade Mountant | ThermoFisher | P36930 | |
| Equipment | |||
| Confocal microscope or fluorescence microscope | Leica SP5 | ||
| Zeiss Axio imager | |||
| Computer | Mac or Pc | ||
| Software | |||
| FIJI |
Citar este artigo
Drosophila Neuromuscular Junction (NMJ) Quantification: A Method to Assess Synaptic Morphology and Function. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20107, doi: (2023).