ניתוח טובולה מאליפיאני מזבוב למבוגרים: בידוד אוסמורגולטוריה ואיבר הפרשה

Published: April 30, 2023

Abstract

מקור: רוסאנו, A. J. ורומרו, M. F. כימות אופטי של pH תאיים ב Drosophila מלנוגאסטר מאפיגי צינור אפיתליה עם מחוון pH מקודד גנטית פלואורסצנט. ג’יי ויס אקספ. (2017).

מאמר זה מתאר את הניתוח של הצינוריות המלפיגיות (MT) מטיסת דרוזופילה נקבה ופרוטוקול לדוגמה מרוסאנו ואח ‘. (2017) שבו MTs מוכנים להדמיה חיה בתא זלוף.

Protocol

פרוטוקול זה הוא קטע מתוך רוסאנו ורומרו, כימות אופטי של pH תאיים ב Drosophila melanogaster מלופיג’יאן Tubule Epithelia עם מחוון pH מקודד גנטית פלואורסצנט, J. Vis. Exp. (2017). 1. הכנת שקופיות פולי-ל-ליסין צייר גבול של 40 x 20 מ”מ עם עט PAP הידרופובי סביב החלק העליון של שקופיות סטנדרטיות של 75 x 25 מ”מ …

Representative Results

איור 1: ייצור מוטות זכוכית לטיפול בצינורות מלופיגיים.A – E. תהליך חימום ומשיכת מוט זכוכית כדי לייצר התחדדות וזווית המתאימים לטיפול ב- MTs. חצים מציינים כיוון ועוצמת כוח שיש ליישם. F.תצלום של כלי זכוכית מפוברק כראוי. סרג?…

Materials

Poly-L-Lysine (PLL) Solution Sigma-Aldrich P4832 Store at 4 °C, can be reused.
Adhesive Perfusion Chamber Covers, adhesive size 1 mm, chamber diameter × thickness 9 mm × 0.9 mm, ports diameter 1.5 mm Sigma-Aldrich GBL622105 Can be substituted as needed to match perfusion system.
Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit Ellsworth Adhesives 184 SIL ELAST KIT 0.5KG Available from multiple vendors.
Helping Hands Soldering Stands Harbor Freight Tools 60501 Available from multiple vendors.
Schneider's Medium Fisher Scientific 21720024 Store at 4 °C in sterile aliquots.
#5 Inox Steel Forceps Fine Science Tools 11252-20 Can be substituted based on experimenter comfort.
35 x 10 mm polystyrene Petri dish Corning Life Sciences Fisher Scientific 08-757-100A Exact brand and size are unimportant.
75 x 25 mm Microscope Slides Corning Life Sciences 2949-75X25 Exact brand and size can vary as long as perfusion wells are compatible.
Filimented Borosilicate Capillary Glass, ID 1.5 mm, OD 0.86 mm, thickness 0.32 mm Warner Instruments 64-0796 Filiment not necessary, glass can be substituted to match perfusion tubing and perfusion wells.
Vacuum Silicone Grease Sigma-Aldrich Z273554 Available from multiple vendors.
Glass rods, 5 mm diameter delphiglass.com 9198 Exact size is personal preference, multiple vendors available
PAP Hydrophobic Pen Sigma-Aldrich Z377821 Available from multiple vendors.
Sealing Film Sigma-Aldrich P7668 Available from multiple vendors.
15 mL Falcon tube BD Falcon 352096 Available from multiple vendors.
50 mL Falcon tube BD Falcon 352070 Available from multiple vendors.
Dissecting Stereoscope Zeiss Discovery.V8 Any dissecting stereoscope can be used.
UAS-pHerry transgenic Drosophila melagnogaster Available from Romero Lab First published: Rossano et al., 2017
capaR-GAL4 driver line Drosophila melagnogaster Available from Romero Lab First published: Terhzaz et al., 2012
c724-GAL4 driver line Drosophila melagnogaster Available from Romero Lab First published: Sozen et al., 1997
Single-edged Carbon Steel Razor Blade Electron Microscopy Sciences 71960 Available from multiple vendors.
Microscopy Slide Folder Fisher Scientific 16-04 Available from multiple vendors.
Bunsen Burner Fisher Scientific 50-110-1231 Available from multiple vendors.
Polystrene Drosophila Rearing Vials with Flugs Genesee Scientific 32-109BF Comparable items can be substituted.
2.5 L Laboratory Ice Bucket Fisher Scientific 07-210-129 Available from multiple vendors.
200 uL barrier pipette tips MidSci AV200 Available from multiple vendors.
200 μL variable volume pipette Gilson Incorporated PIPETMAN P200 Available from multiple vendors.

Play Video

Citar este artigo
Malpighian Tubule Dissection from an Adult Fly: Isolating an Osmoregulatory and Excretory Organ. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20102, doi: (2023).

View Video