Ölçüm% 50 Hemolitik Kompleman (CH 50</subSerum) Faaliyet
Summary
Klasik yolu antikor tarafından aktif ve hedef hücre parçalama içinde sona eriyor. CH<sub> 50</sub> Testi serum örneğinde kompleman aktivitesi bir ölçüsüdür sağlar. Bu video CH belirlenmesinde yer alan adımları gösteriyor<sub> 50</sub> Serum numune sonuçları hesaplama ve yorumlama.
Abstract
Kompleman sistemi, hücre parçalama hedef yol opsonisation yoluyla aktif ve fagositoz kolaylaştırır proteinlerin bir grup. Bireysel kompleman, ancak bu yolun aktivite olarak herhangi bir bilgi sağlamaz belirlenebilir. CH<sub> 50</sub> Klasik kompleman yolunun (Şekil 1) aktivasyonu için bir tarama testi ve yolun herhangi bir bileşenin azaltılması, yokluğu ve / veya hareketsizlikten duyarlıdır. CH<sub> 50</sub>, Tavşan anti-koyun, kırmızı kan hücreleri antikor (haemolysin) ile ön kaplı koyun kırmızı kan hücreleri (SRBC) lyse klasik yolun serum kompleman fonksiyonel kapasite testleri. Antikor kaplı SRBC testi serum, klasik kompleman yolağı aktive olur ve hemoliz sonuçları ile inkübe edilir. Tamamlayıcısı bileşeni yoksa, CH<sub> 50</sub> Seviyesi sıfır olacaktır; klasik yolu bir ya da daha fazla bileşen düşmüş iseniz, CH<sub> 50</sub> Azalacak. Optimal sensitize SRBC sabit bir hacmi her serum seyreltme eklenir. Inkübasyondan sonra, karışım santrifüj ve hemoliz derecesi 540nm süpernatantı salınan hemoglobin absorbansı ölçerek sayısal. Antikor kaplı SRBC lyse serum test çeşitli dilüsyonları kapasitesini inceleyerek tamamlayıcı aktivite miktarı belirlenir. Bu video klasik kompleman yolu tamamlayıcı aktivite düzeyini analiz ilgili deneysel adımlar özetlenir.
Protocol
Discussion
CH 50 testinin pek çok etkileşimler tabi. Bazı SRBC tamamlayan ilişkisiz spontan hemoliz, diğerlerine göre daha kırılgan. Tavşan antikoru yakınlığı çok çok ve bir üreticiden diğerine değişir; bu SRBC bağlar antikor miktarını etkiler. Ayrıca, farklı miktarlarda antikor kaplama SRBC hücrelerinde antikor sonuçları ile SRBC duyarlılaştırıcı süreci. Örnek toplama ve depolama hatası önemli bir potansiyel kaynak vardır. Kompleman örneğin C1q, C3, C4 ve C5 son derece dayanıksı…
Acknowledgements
Yazar Miss Lora Matthews sinematografi teknikleri ve Bay Paul Shepherd gerçekleştirmek için teşekkür etmek istiyorum. Bu proje, Güney Avustralya Üniversitesi, Tıp Laboratuarı programı tarafından finanse edildi.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sheep red blood cells | CSL | 2490201 | Use at 1% final | |
| Serum | Human serum | |||
| Rabbit Anti-Sheep Haemolytic serum (RBCs), Unconjugated | AdB Serotec | C12HSB | ||
| 96 well flat bottom plate | Sarstedt | 83.1839 | ||
| Veronal buffered saline | Use at 1x final | |||
| Waterbath | ||||
| Plate reader | ||||
| 37°C room/incubator |
