Die Messung der 50% Hämolytische Complement (CH 50) Aktivität von Serum
Summary
Der klassische Weg wird durch Antikörper aktiviert und gipfelt in Ziel-Zell-Lyse. Die CH<sub> 50</sub> Test liefert ein Maß für die Komplement-Aktivität einer Serumprobe. Dieses Video zeigt die Schritte bei der Bestimmung der CH beteiligt<sub> 50</sub> Einer Serumprobe, die Berechnungen und Interpretation der Ergebnisse.
Abstract
Das Komplementsystem ist eine Gruppe von Proteinen, die bei Aktivierung führen zu Zelllyse Ziel und erleichtert die Phagozytose durch Opsonisierung. Individuelle Komplement-Komponenten quantifiziert Dies bedeutet jedoch keine Auskunft über die Aktivität der Weg sein. Die CH<sub> 50</sub> Ist ein Screening-Test für die Aktivierung des klassischen Komplementweges (Abb. 1) und es ist empfindlich auf die Reduktion, Abwesenheit und / oder Untätigkeit eines jeden Teils des Weges. Die CH<sub> 50</sub> Tests die Funktionsfähigkeit des Serum-Komplement-Komponenten von den klassischen Weg, um rote Blutzellen von Schafen (SRBC) vorbeschichtet mit Kaninchen-Anti-Schaf-Erythrozyten-Antikörper (Hämolysin) zu lysieren. Als Antikörper-beschichteten SRBC mit Testserum, den klassischen Weg der Komplementaktivierung wird aktiviert und Hämolyse Ergebnisse inkubiert. Wenn ein Komplement-Komponente fehlt, wird der CH<sub> 50</sub> Ebene Null sein wird, wenn eine oder mehrere Komponenten des klassischen Weges sind zurückgegangen, die CH<sub> 50</sub> Verringert. Ein festes Volumen von optimal sensibilisiert SRBC wird jeder Serumverdünnung aufgenommen. Nach der Inkubation wird das Gemisch zentrifugiert und der Grad der Hämolyse wird durch Messung der Absorption des Hämoglobins in den Überstand bei 540 nm freigesetzt quantifiziert. Die Höhe der Komplement-Aktivität wird durch die Untersuchung die Fähigkeit der verschiedenen Verdünnungen der Test Serum-Antikörper beschichtet SRBC lysieren bestimmt. Dieses Video beschreibt die experimentellen Schritte bei der Analyse der Ebene der Komplement-Aktivität des klassischen Komplementweges beteiligt.
Protocol
Discussion
Die CH 50-Test unterliegt vielen Störungen. Einige SRBC sind empfindlicher als andere, was zu spontanen Hämolyse, die nicht mit Aktivitäten zu ergänzen ist. Die Affinität der Kaninchen-Antikörper variiert von Charge zu Charge und von einem Hersteller zum anderen, dies beeinflusst die Höhe des Antikörper, der an der SRBC bindet. Auch der Prozess der Sensibilisierung SRBC mit Antikörper Ergebnisse in Zellen mit unterschiedlichen Mengen der Antikörper-Beschichtung der SRBC. Gewinnung und Lagerung sind …
Acknowledgements
Der Autor bedankt sich bei Frau Lora Matthews für die Durchführung der Technik und Herr Paul Shepherd für Kinematographie danken. Dieses Projekt wurde von der University of South Australia, Laboratoriumsmedizin Programm gefördert.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sheep red blood cells | CSL | 2490201 | Use at 1% final | |
| Serum | Human serum | |||
| Rabbit Anti-Sheep Haemolytic serum (RBCs), Unconjugated | AdB Serotec | C12HSB | ||
| 96 well flat bottom plate | Sarstedt | 83.1839 | ||
| Veronal buffered saline | Use at 1x final | |||
| Waterbath | ||||
| Plate reader | ||||
| 37°C room/incubator |
