Mesurer le complément hémolytique 50% (CH 50) Activité de Sérum
Summary
La voie classique est activée par l'anticorps et culmine dans la lyse des cellules cibles. Le CH<sub> 50</subTest> fournit une mesure de l'activité du complément d'un échantillon de sérum. Cette vidéo montre les étapes impliquées dans la détermination de la CH<sub> 50</sub> D'un échantillon de sérum, les calculs et l'interprétation des résultats.
Abstract
Le système du complément est un groupe de protéines qui lorsqu'il est activé conduire à la lyse des cellules cibles et facilite la phagocytose par opsonisation. Composants du complément individuel peuvent être quantifiés mais cela ne donne aucune information quant à l'activité de la voie. Le CH<sub> 50</sub> Est un test de dépistage pour l'activation de la voie classique du complément (fig 1) et il est sensible à la réduction, l'absence et / ou l'inactivité de tout composant de la voie. Le CH<sub> 50</sub> Teste la capacité fonctionnelle des composants du complément sérique de la voie classique pour lyser des hématies de mouton (GRM) pré-enduites de lapin anti-mouton d'anticorps des globules rouges (hémolysine). Lorsque recouvertes d'anticorps SRBC sont incubées avec le sérum à tester, la voie classique du complément est activé et les résultats hémolyse. Si un composant du complément est absent, le CH<sub> 50</sub> Niveau sera égal à zéro, si un ou plusieurs composants de la voie classique sont diminués, le CH<sub> 50</sub> Sera diminué. Un volume fixe de façon optimale SRBC sensibilisés est ajouté à chaque dilution de sérum. Après incubation, le mélange est centrifugé et le degré d'hémolyse est quantifié en mesurant l'absorbance de l'hémoglobine libérée dans le surnageant à 540nm. Le montant de l'activité du complément est déterminé en examinant la capacité des différentes dilutions de sérum à tester afin de lyser SRBC revêtues d'anticorps. Cette vidéo décrit les étapes impliquées dans l'analyse expérimentale du niveau d'activité complément de la voie classique du complément.
Protocol
Discussion
Le CH 50 dosage est soumis à de nombreuses interférences. Certains SRBC sont plus fragiles que d'autres, ce qui entraîne une hémolyse spontanée qui n'est pas lié à compléter l'activité. L'affinité des anticorps de lapin varie d'un lot à et d'un fabricant à l'autre, ce qui affecte la quantité d'anticorps qui se lie à la GRM. En outre, le processus de sensibilisation SRBC avec des résultats d'anticorps dans les cellules avec différentes quantités de revêteme…
Acknowledgements
L'auteur tient à remercier Mlle Lora Matthews pour l'exécution de la technique et de M. Paul Berger pour la cinématographie. Ce projet a été financé par l'Université d'Australie du Sud, le programme de médecine de laboratoire.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sheep red blood cells | CSL | 2490201 | Use at 1% final | |
| Serum | Human serum | |||
| Rabbit Anti-Sheep Haemolytic serum (RBCs), Unconjugated | AdB Serotec | C12HSB | ||
| 96 well flat bottom plate | Sarstedt | 83.1839 | ||
| Veronal buffered saline | Use at 1x final | |||
| Waterbath | ||||
| Plate reader | ||||
| 37°C room/incubator |
