测量50％的溶血性补充（CH 50）活性的血清
Summary
经典途径激活抗体和靶细胞裂解高潮。这架CH<sub> 50</sub>检测提供了一个补体活性的血清样本的措施。本视频演示的CH在确定所涉及的步骤<sub> 50</sub>血清样本，计算和解释结果。
Abstract
补体系统是一组蛋白质，当激活，导致靶细胞裂解，促进吞噬通过opsonisation。个人补体成分是可以量化的，但这不提供任何信息的途径的活动。这架CH<sub> 50</sub>是激活经典补体途径（图1）筛选实验，它是敏感的任何组件的通路减少，缺乏和/或闲置。这架CH<sub> 50</sub>测试的经典途径裂解绵羊红细胞（SRBC），兔抗绵羊红细胞抗体（溶血）预涂血清补体成分的功能性。当抗体包被的SRBC培养与血清测试，激活补体经典途径和溶血结果。如果缺少的一个补充部分，在CH<sub> 50</sub>等级将为零;如果一个或多个组件的经典途径是减少，在CH<sub> 50</sub>会有所下降。一个固定体积的最佳致敏SRBC被添加到每个血清稀释。孵育后，将混合物离心和量化的溶血程度是通过测量血红蛋白释放到上清液于540nm处的吸光度。补体活性的金额是由研究能力的各种测试血清稀释溶解抗体包被的SRBC。此视频概述参与分析经典补体途径的补充活动水平的实验步骤。
Protocol
Discussion
CH 50含量是受到很多干扰。有些SRBC的是比其他人更脆弱，导致自发溶血补体活性无关。兔抗体的亲和力很多很多，从生产厂家之一到另一个不同，这影响的SRBC结合的抗体量。此外，敏与在细胞与不同数量的抗体涂层的SRBC的抗体结果SRBC的过程。标本采集和存储是一个重要的潜在的错误来源。补体成分如补体C1q，C3，C4和C5是非常不稳定的，因此适当的样品处理是至关重要的。长时间暴露在?…
Acknowledgements
笔者想感谢劳拉马修斯小姐表演的技巧和摄影郑明牧羊犬。这个项目是由南澳大学，实验室医学程序。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sheep red blood cells | CSL | 2490201 | Use at 1% final | |
| Serum | Human serum | |||
| Rabbit Anti-Sheep Haemolytic serum (RBCs), Unconjugated | AdB Serotec | C12HSB | ||
| 96 well flat bottom plate | Sarstedt | 83.1839 | ||
| Veronal buffered saline | Use at 1x final | |||
| Waterbath | ||||
| Plate reader | ||||
| 37°C room/incubator |
