Bireysel Az hücreler baskın Sitoloji Numune Cell Block Hazırlama
Summary
Tek tek dağılmış hücreleri ve küçük hücre grupları içeren sitolojisinde AV-işaretleyici ile hücre bloklarının hazırlanması için Shidham yöntemi.
Abstract
Bu video için Shidham tek tek dağılmış hücreleri ve küçük hücre grupları içeren sıvı bazlı servikovajinal sitolojisinde hücre bloklarının hazırlanması yöntemi göstermektedir. Bu teknik, geleneksel laboratuvar ekipmanları ile HistoGel (Thermo Scientific) kullanır.
Hücre blok bölümlerinin kullanımı, non-jinekolojik sitoloji değerlendirme için değerli bir yardımcı araçtır. Lezyonun mimarisi de dahil olmak üzere ek morfolojik örnek ayrıntılı çalışma sitopatolog sağlar. En önemlisi, in-situ hibridizasyon testleri (FISH / CISH) ve in-situ polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) gibi immünsitokimya gibi yan çalışmaların değerlendirilmesi için izin verir. Geleneksel hücre blok hazırlama teknikleri, genellikle vücut sıvısı efüzyonlar ve ince iğne aspirasyon biyopsileri, çoğunlukla jinekolojik olmayan sitolojisinde uygulanır olmuştur.
Sıvı bazlı servikovajinal örneklerinde birçok bireysel dağınık hücreleri ile bunların non-jinekolojik bir muadillerine göre nispeten daha az hücresel. Bu nedenle, hücre blok kesimleri içinde yeterli hücresellik başarmak zordur. Buna ek olarak, blok kesit histotechnologist hücrelerin en yüksek konsantrasyon hangi düzeyde görselleştirmek. Bu nedenle, uygun seviyeye bölümlerde test için cam slaytlar aktarılacak seçilebilir hangi izlemek için zordur. Sonuç olarak, ya geçmişte kesme veya yeterince derin kesim tarafından ilgi hücreler ile hücre bloğu alanı, cevapsız olabilir. Shidham yöntemi için geçerli protokol, bu sorunları giderir. Bu protokol standart ve jinekolojik sıvı bazlı sitoloji örneklerinde için rapor olmasına rağmen, efüzyon sıvılar için hücre blok bölümlerde tanı malzeme kalitesi, ince iğne aspirasyon biyopsisi, manşonlarla, kist içeriği vb gibi Jinekolojik olmayan örneklerin de uygulanabilir olabilir.
Protocol
Discussion
Hücre blokları çeşitli sitolojisinde (1) değerlendirilmesi için değerli bir araç. En önemlisi, örnek mimari detaylara ek olarak, hücre bloklarının gibi immünsitokimya gibi yardımcı çalışmalar, kromojenik / floresan in-situ hibridizasyon testleri (FISH / CISH) ve in-situ PCR değerlendirilmesi için izin verir. Hücre blok hazırlanması için çeşitli yöntemler açıklanmıştır. Ancak, bunların çoğu nispeten birçok hücreleri içeren ve doku FNA aspiratlarda gibi microfragments ve seröz efüzyonlar (1,3,4,5) gibi bazı sıvılar ile non-jinekolojik sitoloji örnekleri için uygundur.
Hücre bloklarının öncelikle immünositokimyasal değerlendirilmesi için bir fırsat sağladığı için, onların işleme tercihen formalin ile fikse parafine gömülü (FFPE) dokuları ile benzer olmalıdır. Sonuçta hücre blok bölümden immünositokimyasal değerlendirmesinden sonra elde edilen sonuçlar bu FFPE doku kesitlerinde ağırlıklı yayınlanan literatür ile karşılaştırıldı. Protokol herhangi bir değişikliğin potansiyel uzlaşma ve farklı fiksatif ve diğer rutin FFPE için kullanılan daha reaktif dizileri ile işlenmiş hücre bloklarının elde edilen sonuçların geçerliliğini geçersiz. Bazı ticari teknikleri, diğer fiksatif-reaktif maruz maruz kalma bir protokol ile işleme dezavantajı olabilir.
Hücre blok hazırlanması, tortu ve doku parçaları önemli bir miktarı ile örnekler için çeşitli yöntemler mevcuttur. Prensip olarak, konsantre sedimanlar bazı jel veya pıhtılaşma prensibi tarafından desteklenmektedir. Manevra düğmesine sonra cerrahi patoloji örneklerinde / biyopsileri gibi işlendikten sonra parafine gömüldü.
Kullanılan jeller, jelatin, agar, fibrinojen / plazma trombin ve diğer ticari jeller gibi HG içerir. Konsantrasyon yöntemleri, çeşitli tipte membran boyunca hücreler santrifüj tarafından tortu basit peletleme konsantrasyonu değişir. Örnekler şunlardır: Milipore, collodin (Celloidin) torba veya cam slayt (1) sitoloji smear hücreleri kazıma. Ayrıca jeller agar ve jelatin farklı kombinasyonları deneyerek çeşitli değerlendirildi. Kombinasyonların hiçbiri, katılaşmış jel kolayca manevra diski tek parça halinde numune gömülü hücreler elde etmek için bir firma yeterince tutarlılık elde etti. HG uygun tutarlılık gösterdi ve tecrübemizi HG hücre blok bölümlerde immün sonuç mükemmel olmuştur.
Yukarıda da belirtildiği gibi servikovajinal sitoloji için Sıvı bazlı sitoloji (LBC) örnekleri Jinekolojik olmayan örneklerin daha az hücresel. Jinekolojik LBC örneklerin yanı sıra, ağırlıklı olarak bireysel servikovajinal mukoza dağınık eksfolyatif yüzeysel hücreler içeriyor. Bu nedenle, hücre bloğu bölümleri içinde uygun hücresellik özel bir yaklaşım olmadan elde edilebilir. Bu tek başına blok hücresel bileşenleri dağınık olarak bölüm kesim sırasında histotechnologist görülen olması değil. Hücrelerin bölümlerde görünen başlatmak hangi düzeyi ya çoğu hücremizde düzeyini geçmiş kesim tarafından ya da değil, takdir olarak değil edebilir ve atlanabilir örnek hücreleri (Şekil 4) ile en yüksek konsantrasyon seviyesine yeterince derin kesme. Shidham protokol HG, orta ve geleneksel laboratuvar ekipmanları (2) (Şekil 2) gömme olarak kullanarak bu konuların her iki adres.
Bu protokol, iki önemli özellikleri (Şekil 1) Aşağıdaki içerir:
- Konsantrasyon ve hücre bloğu (Şekil 5) kesim yüzeyine paralel ve bitişik dar bir düzlemde tek tek dağılmış hücreleri uyum.
- Tabelasını olarak bir deniz feneri gibi koyu AV-işaretleyici dahil edilmesi. Bu aşağıdaki özelliklere ulaşmak için kritik öneme sahiptir:
- Belirlenmesi ve hücreleri hücre blokta yoğunlaştığı hangi düzeyde izlenmesi koyu renkli tabelasını hücre bloğu içinde tek tek dağılmış hücreleri (Şekil 4) yer olması bekleniyor hangi maruziyet düzeyi vurgulamaktadır. Engeller (seviye geçmiş en hücreleri ile kesme) veya hücre bloğu kırarak (örnek hücrelerinin yüksek konsantrasyon seviyesine yeterince derin kesme) ve en yüksek konsantrasyon ile ilgili hücre bloğunda seviyesinden bölümlerin seçimine izin kesmesini hücre.
- Bölümlerde koyu renkli tabelasını da aynı hücrelerden farklı slaytlar hücre bloğu (Şekil 4) farklı seri bölümlerde araştırma ve tanımlamak için bir referans noktası olarak hizmet vermektedir. Yorumlanması ve SCIP yaklaşımı özellikle hücrelerin immunoprofile aynı hücrelerin farklı bölümler (6,7) takip koordinat özelliklerini değerlendirirken Bu kritik.
Rağmen our protokolü standardize edilmiş ve sıvı bazlı servikal sitoloji örnekleri için bildirilen, aynı zamanda efüzyon sıvılar, ince iğne aspirasyon biyopsisi, manşonlarla, kist içeriği vs gibi diğer birçok Jinekolojik olmayan örneklerin yanı sıra tanısal verimi artırmak için kullanılan olabilir AV marker geliştirilmiş kolaylaştırmak Bu örneklerin hücre blok bölümden immünohistokimyasal değerlendirme sırasında SCIP yaklaşım uygulama. Gömme orta ilgili adımları uygun değişiklikleri ile diğer reaktifler tarafından değiştirilebilir. HG, oda sıcaklığında (1) Trombin tarafından jel plazma (Fibrinojen) tarafından değiştirilebilir.
Acknowledgements
Yazarlar AV kalemi ile hücre blok kesme bölümünde gösteren Chris Chartrand, HT (ASCP) teşekkür ederim.
Referências
- Shidham, V. B., Epple, J., Shidham, V. B., Atkinson, B. F. Chapter 14, Appendix I: Collection and processing of effusion fluids for cytopathologic evaluation. Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids. , .
- Varsegi, G., D’Amore, K., Shidham, V. p16INK4a Immunocytochemistry as an Adjunct to Cervical Cytology – Potential Reflex Testing on Specially Prepared Cellblocks from Residual Liquid Based Cytology (LBC) Specimens. Modern Pathology 22: 98th Annual Meeting of United States and Canadian Academy of Pathology. , 97a-97a (2009).
- Nigro, K., Tynski, Z., Wasman, J., Abdul-Karim, F., Wang, N. Comparison of cell block preparation methods for nongynecologic ThinPrep specimens. Diagn Cytopathol. 35, 640-643 (2007).
- Saleh, H. A., Hammoud, J., Zakaria, R., Khan, A. Z. Comparison of Thin-Prep and cell block preparation for the evaluation of Thyroid epithelial lesions on fine needle aspiration biopsy. CytoJournal. 5, 3-3 (2008).
- Kyroudi, A., Paefthimiou, M., Symiakaki, H., Mentzelopoulou, P., Voulgaris, Z., Karakitsos, P. Increasing diagnostic accuracy with a cell block preparation from thin-layer endometrial cytology: a feasibility study. Acta Cytol. 50, 63-69 (2006).
- Atkinson, B. F., Shidham, V. B., Atkinson, B. F. Chapter 5: Immunocytochemistry of effusion fluids: introduction to SCIP approach (Chapter 5. Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids. , (2007).
- Shidham, V. B., Shidham, V. B., Atkinson, B. F. Chapter 15, Appendix II: Immunocytochemistry of effusions processing and commonly used immunomarkers. Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids. , (2007).
