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La importancia de la concentración de la proteína correcta para la cinética y la determinación de afinidad en el análisis de la estructura-función
JoVE 신문
생물학
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JoVE 신문 생물학
The Importance of Correct Protein Concentration for Kinetics and Affinity Determination in Structure-function Analysis
DOI:

19:16 min

March 17, 2010

Chapters

  • 00:00Title
  • 01:38Introduction
  • 02:30Experimental Design
  • 03:58Immobilization of the Ligand Papain for CFCA Analysis
  • 07:34Determining Cystatin B Concentration Using the CFCA Assay
  • 11:07Measuring the Kinetics of Cystatin B binding to Papain
  • 17:13CFCA assay and Kinetics of Cystatin B binding to Papain Representative Results
  • 18:47Conclusion

Summary

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Nosotros aplicamos la etiqueta sin análisis de la interacción de proteínas utilizando Biacore X100 para el análisis de estructura-función de la unión de varios mutantes cistatina B a la papaína través de la caracterización cinética. Libre de calibración de análisis de concentración (ACCP) mide la concentración de proteína con actividad de unión retenido sin la necesidad de una curva patrón. Nos muestran que la confirmación de las concentraciones de uso de la ACCP aumenta la fiabilidad de los análisis cinético y que las constantes cinéticas se puede determinar de forma fiable, incluso si la actividad de una proteína recombinante se reduce.

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