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In Vitro Diretto Evoluzione di una restrizione Endonucleato con più stringente specificità
章
- 00:05Introduction
- 00:49Split-and-Mix Synthesis of Mutagenic Primers
- 02:34Performing Compartmentalized In Vitro Transcription-translation Reaction
- 05:07Continued Processing of Libraries and Selection
- 07:20Results: Examples of Screening of NlaIV Variants for Sequence Specificity Alteration
- 08:16Conclusion
Le endonucleasi di restrizione con nuova specificità della sequenza possono essere sviluppate da enzimi che riconoscono una sequenza parzialmente degenerata. Qui forniamo un protocollo dettagliato che abbiamo usato con successo per alterare la specificità della sequenza dell'enzima NlaIV. Gli ingredienti chiave del protocollo sono la compartimentazione in vitro della reazione di trascrizione/traduzione e la selezione di varianti con nuove specificità di sequenza.
