Rekombination und Gene-Targeting

Eines der am häufigsten verwendeten Werkzeuge der modernen Biologie ist molekulare Klonierung mit Restriktionsenzymen, die kompatibel enden zwischen DNA-Fragmente zu schaffen, die ihnen ermöglichen, miteinander verbunden werden. Diese Technik hat jedoch bestimmte Einschränkungen, die seine Eignung für große oder komplexe DNA-Konstrukt-Generation zu begrenzen. Eine neuere Technik, die einige dieser Mängel Adressen ist Restriktionsenzymen, die DNA mit Hilfe homologe Rekombination (HR), den Austausch zwischen unterschiedlichen DNA-Molekülen basierend auf erstreckt sich von ähnlichen oder identischen Sequenzen modifiziert. Zusammen mit Gene targeting-, die endogene HR Genom eines Organismus an einem bestimmten Loci verändern nutzt, haben HR-basierte Klonierungstechniken erheblich verbessert die Geschwindigkeit und Wirksamkeit von Hochdurchsatz-Gentechnik.

In diesem Video stellen wir die Grundsätze des HR, sowie die grundlegenden Komponenten erforderlich, um ein Experiment von Restriktionsenzymen, einschließlich der Rekombination zuständigen Organismen und genomische Bibliotheken wie bakterielle künstliche Chromosomen (BAC) durchführen. Dann gehen wir durch ein Protokoll, die Restriktionsenzymen verwendet, um einen gen-targeting Vektor zu generieren, der letztlich an embryonalen Stammzellen ein transgenen Tieres generieren transfiziert werden können. Schließlich werden einige Anwendungen, die den nutzen und die Vielzahl von Restriktionsenzymen Techniken markieren vorgestellt.