Die Immunhistochemie (IHC) ist eine Methode, um die Anwesenheit und die Lokalisation von Proteinen in Geweben zu bestimmen. Drosophila Larven sind besonders gut durch die Einfachheit mit welcher sie für die Färbung verarbeitet werden können für die IHC Methode geeignet. Außerdem sind Larven durchsichtig, was bedeutet dass einge Gewebe direkt ohne Präparation abgebildet werden können.
In der IHC Methode werden Proteine durch Antikörper nachgewiesen, welche spezifisch an die „Epitope“ des Zielproteins binden. Um die Epitope zu erhalten, müssen die Gewebe vor der Färbung fixiert werden. Außerdem müssen die Zellen mit Detergenzien permeabilisiert werden, so dass die Antikörper die Zellwand penetrieren können. Dieses Video zeigt detailliert welche Reagenzien, Instrumente und Methoden wichtig für die Färbung von präparierten Larvengeweben sind. Dazu gehören die Fixierung, das Blockieren und die Einfärbung. Wir zeigen außerdem wie man Gewebe auf Objektträgern für die Fluoreszenzmikroskopie befestigt. Schließlich zeigen wir eine weite Reihe von Anwendungen für diese Methoden (und einige Variationen).
手順
Drosophila melanogaster ist wegen seiner Einfachheit und Vielseitigkeit ein weit verbreiteter Modellorganismus. Die Immunhistochemie einer Drosophila Larvenpräparation ist eine wertvolle Methode, mit welcher man die Anwesenheit, die Position, und die Kolokalisation von Proteinen bestimmen kann. Dieses Video zeigt die grundlegenden Methoden der Präparation, Fixierung, Blockierung, und dem Befestigen von Larvengewebe von Drosophila. Es werden außerdem Beispiele von Anwendungen gezeigt….