Optimisation des techniques urodynamiques de souris pour une meilleure précision
概要
Ce protocole fournit un guide pour imperméabiliser la peau avec du cyanoacrylate afin d’éviter l’absorption d’urine par la fourrure et la peau. Il comprend des instructions pour l’application de la colle sur la peau, l’implantation d’un cathéter vésical et des électrodes pour la cystométrie et les enregistrements d’électromyographie du sphincter urétral externe chez les souris éveillées.
Abstract
Une mesure précise des paramètres urinaires chez les souris éveillées est cruciale pour comprendre le dysfonctionnement des voies urinaires inférieures (LUT), en particulier dans des conditions telles que les lésions post-traumatiques de la moelle épinière (LME) neurogènes de la vessie. Cependant, la réalisation d’enregistrements de cystométrie chez la souris présente des défis notables. Lorsque les souris sont en position couchée et restreinte pendant les sessions d’enregistrement, l’urine a tendance à être absorbée par la fourrure et la peau, ce qui entraîne une sous-estimation du volume évasé (VV). L’objectif de cette étude était d’améliorer la précision des enregistrements de cystométrie et d’électromyographie du sphincter urétral externe (EUS-EMG) chez les souris éveillées. Nous avons développé une méthode unique utilisant un adhésif cyanoacrylate pour créer une barrière cutanée imperméable autour du méat urétral et de l’abdomen, empêchant l’absorption d’urine et assurant des mesures précises. Les résultats montrent qu’après l’application du cyanoacrylate, la somme de VV et de RV est restée cohérente avec le volume salin infusé, et qu’aucune zone humide n’a été observée après l’expérience, ce qui indique une prévention réussie de l’absorption d’urine. De plus, la méthode a simultanément stabilisé les électrodes connectées au sphincter urétral externe (EUS), assuré des signaux d’électromyographie (EMG) stables et minimisé les artefacts causés par le mouvement de la souris réveillée et la manipulation de l’expérimentateur. Les détails méthodologiques, les résultats et les implications sont discutés, soulignant l’importance d’améliorer les techniques urodynamiques dans la recherche préclinique.
Introduction
Le stockage et la libération de l’urine dépendent de l’activité coordonnée de la vessie et du sphincter urétral externe (EUS). Dans certaines pathologies telles que la vessie neurogène, les muscles détrusors de la vessie et le sphincter peuvent devenir dysfonctionnels, entraînant d’importants problèmes de vessie, en particulier après une lésion traumatique de la moelle épinière (LME)1.
Les petits rongeurs sont couramment utilisés comme modèle expérimental pour étudier la fonction préclinique des voies urinaires inférieures (LUT)2. Les techniques d’enregistrement de la cystométrie de remplissage (FC) et de l’électromyographie EUS (EUS-EMG) peuvent fournir des informations objectives précises en fonction du choix des méthodes, de la mesure précise et de l’interprétation des résultats3. Les tests urodynamiques sont couramment utilisés pour évaluer le volume mictionnel (VV), l’efficacité mictionnelle (VE) et la capacité de la vessie4. L’EV mesure l’efficacité avec laquelle la vessie peut se vider. Il est calculé en divisant le volume évacué par la somme des volumes vides et résiduels (VV+RV). D’autre part, la capacité de la vessie est calculée en ajoutant la VV (la quantité d’urine expulsée pendant la miction) à la RV (la quantité d’urine restante dans la vessie après la miction)5. Par conséquent, la mesure de VV et de RV sont les clés pour déduire d’autres paramètres.
La mesure précise de la VV chez la souris lors d’essais urodynamiques présente divers défis. L’urine des rongeurs, lorsqu’ils sont physiquement retenus en position couchée, a tendance à être aspirée vers le bas à travers la paroi abdominale ventrale en raison de l’influence de la gravité6. Ce phénomène peut entraîner l’absorption de l’urine par la fourrure abdominale et la peau, ce qui, à son tour, sous-estime le volume d’urine excrété. Compte tenu de la faible quantité d’urine produite par la souris, l’impact de cette absorbance sur la précision des résultats est encore plus prononcé7. De plus, dans les modèles de LME, la VV est souvent plus faible que chez les souris normales en raison de l’impact de la dyssynergie du sphincter détrusor (DSD), qui augmente le risque de pressions de point de fuite et d’absorption d’urine par la fourrure8. Ces facteurs ont un impact significatif sur les résultats. Par conséquent, une mesure précise de la VV et du VD lors des études urodynamiques terminales chez la souris est cruciale9. À l’heure actuelle, il y a un manque de détails dans les méthodologies fournies dans la littérature publiée sur la façon de mesurer avec précision le volume d’urine dans des modèles murins.
L’adhésif cyanoacrylate est un type de colle couramment utilisé dans les procédures chirurgicales sur des modèles humains et animaux en raison de ses propriétés de liaison rapides et efficaces 10,11,12. Cet adhésif est particulièrement utile pour fermer les plaies et les lacérations, car il forme une liaison solide et flexible lorsqu’il est appliqué sur la peau13. De plus, il peut être une excellente barrière contre l’urine et l’humidité qui peuvent entrer en contact avec la fourrure et les plaies11.
Dans cet article, nous avons développé une technique nouvelle et rentable qui utilise un adhésif cyanoacrylate pour obtenir des résultats précis en cystométrie et en enregistrements EUS-EMG chez les souris éveillées. Cette méthode sera bénéfique pour comprendre les causes sous-jacentes du dysfonctionnement de la vessie et concevoir des traitements plus efficaces pour les troubles LUT.
Protocol
Representative Results
Discussion
Cette technique urodynamique décrit une procédure améliorée pour mesurer le volume d’urine et le signal EUS-EMG chez des souris éveillées et immobilisées. La présence de fourrure autour de l’urètre, du méat et de la région abdominale peut interférer avec la précision de la mesure de la VV en absorbant l’urine. Bien que la fourrure entourant le méat urétral et l’abdomen ait été soigneusement rasée avant l’opération, les petites fourrures restantes dans ces zones et la peau absorbaient toujours…
開示
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Cette étude a été financée par NIH-NINDS (R21NS130241), IND DEPT HLTH (55051, 74247, 74244) et US ARMY (HT94252310700).
Materials
| Accelerator | BOB SMITH INDUSTRIES | BSI-152 | |
| Cyanoacrylate | TED PELLA, Inc | 14478 | |
| Disposable base mold | TED PELLA, Inc | 27147-4 | |
| Infusion pump | Harvard Apparatus PHD ULTRA | 70-3006 | |
| Isoflurane | Henry Schein Inc | 1182097 | |
| PIN | World Precision Instruments | 5482 | |
| Polyethylene Tubing 30 | Braintree Scientific Inc | PE30 | |
| Sterile Weighing Boat | HEATHROW SCIENTIFIC | 797CK2 | |
| Windaq/Lite | DATAQ INSTRUMENTS | 249022 |
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