概要

Chirurgie d’implantation pour la stimulation du nerf vague abdominal et études d’enregistrement chez le rat éveillé

Published: January 19, 2024
doi:

概要

Le présent protocole décrit la technique chirurgicale d’implantation d’un réseau d’électrodes sur le nerf vague abdominal chez le rat, ainsi que les méthodes de test et de stimulation électrophysiologiques chroniques à l’aide du dispositif implanté.

Abstract

La stimulation du nerf vague abdominal (SNV) peut être appliquée à la branche sous-diaphragmatique du nerf vague des rats. En raison de son emplacement anatomique, il n’a pas d’effets respiratoires et cardiaques hors cible couramment associés au SNV cervical. L’absence d’effets respiratoires et cardiaques hors cible signifie que l’intensité de la stimulation n’a pas besoin d’être réduite pour réduire les effets secondaires couramment ressentis lors du SNV cervical. Peu d’études récentes démontrent les effets anti-inflammatoires du VNS abdominal dans des modèles de rats de maladies inflammatoires de l’intestin, de polyarthrite rhumatoïde et de réduction de la glycémie dans un modèle de rat de diabète de type 2. Le rat est un excellent modèle pour explorer le potentiel de cette technologie en raison de l’anatomie bien établie du nerf vague, de la grande taille du nerf qui permet une manipulation facile et de la disponibilité de nombreux modèles de maladies. Nous décrivons ici les méthodes de nettoyage et de stérilisation du réseau d’électrodes VNS abdominales et le protocole chirurgical chez le rat. Nous décrivons également la technologie requise pour confirmer la stimulation supraseuil en enregistrant les potentiels d’action composés évoqués. Le VNS abdominal a le potentiel d’offrir un traitement sélectif et efficace pour une variété d’affections, y compris les maladies inflammatoires, et l’application devrait s’étendre de la même manière que le VNS cervical.

Introduction

La stimulation du nerf vague (SNV) administrée au site cervical dans le cou est un traitement approuvé par la Food and Drug Administration (FDA) des États-Unis pour l’épilepsie réfractaire, la dépression réfractaire et la réadaptation post-AVCischémique 1, et approuvé par la Commission européenne pour l’insuffisance cardiaque en Europe2. Le VNS cervical non invasif est approuvé par la FDA pour la migraine et les maux de tête1. Son application devrait s’étendre, avec des essais cliniques récents montrant l’efficacité de la SNV dans d’autres indications telles que la maladie de Crohn3, la polyarthrite rhumatoïde 4,5 et l’intolérance au glucose et le diabète de type 2 6,7. Bien que prometteur, le SNV cervical peut provoquer une bradycardie et une apnée en raison de l’activation hors cible des fibres nerveuses qui innervent les poumons et le cœur 8,9,10. Des effets secondaires tels que toux, douleur, altération de la voix, maux de tête et augmentation de l’indice d’apnée-hypopnée sont fréquemment rapportés chez les patients recevant le VNScervical 11,12. La réduction de la force de stimulation est une stratégie courante pour réduire ces effets secondaires, mais une charge réduite peut limiter l’efficacité du traitement par SNV en n’activant pas les fibres thérapeutiques11. À l’appui de cette hypothèse, le taux de réponse des patients recevant une stimulation de haute intensité pour le traitement de l’épilepsie était plus élevé que celui des patients recevant une stimulation de faible intensité13.

La SNV abdominale est appliquée sur le nerf vague sous-diaphragmatique, au-dessus des branches hépatique et cœliaque14 (Figure 1). Notre étude précédente a démontré que chez le rat, le VNS abdominal ne provoque pas d’effets secondaires cardiaques ou respiratoires associés au VNScervical 10. Des études antérieures démontrent également des effets anti-inflammatoires du VNS abdominal dans un modèle de rat de maladie inflammatoire de l’intestin et de polyarthrite rhumatoïde10,15 ainsi qu’une réduction de la glycémie dans un modèle de rat de diabète de type 216. Récemment, la technologie VNS abdominale a été traduite pour un premier essai clinique chez l’homme pour le traitement des maladies inflammatoires de l’intestin (NCT05469607).

Le réseau d’électrodes des nerfs périphériques utilisé pour stimuler le nerf vague abdominal (WO201909502017) a été développé sur mesure pour être utilisé chez le rat et comprend deux ou trois paires d’électrodes en platine placées à 4,7 mm l’une de l’autre, soutenues par un brassard en élastomère de silicone de qualité médicale, une languette de suture pour ancrer le réseau à l’œsophage, un fil conducteur et un connecteur percutané à monter sur la région lombaire (figure 2). Le fil conducteur est creusé sous la peau du côté gauche de l’animal. La conception à paires d’électrodes multiples permet une stimulation électrique du nerf ainsi que l’enregistrement des potentiels d’action composés évoqués électriquement (ECAP), ce qui confirme le placement correct de l’implant sur le nerf et les intensités de stimulation supraseuil. Le VNS abdominal est bien toléré chez les rats en mouvement libre pendant les mois 10,15,16. Cela permet d’évaluer son efficacité sur des modèles de maladies.

Ce manuscrit décrit les méthodes de stérilisation par réseau d’électrodes, de chirurgie d’implantation du nerf vague abdominal, de stimulation chronique et d’enregistrement des ECAP chez des rats éveillés pour étudier l’efficacité de la VNS abdominale dans divers modèles de maladies. Ces méthodes ont été développées à l’origine pour étudier l’efficacité de la VNS abdominale dans le modèle de rat de maladie inflammatoire de l’intestin10 et ont également été utilisées avec succès pour un modèle de rat de polyarthrite rhumatoïde15 et de diabète16.

Protocol

Toutes les procédures impliquant des animaux ont été approuvées par le Comité d’éthique animale de l’hôpital St. Vincent (Melbourne) et étaient conformes au Code australien pour le soin et l’utilisation des animaux à des fins scientifiques (Conseil national de la santé et de la recherche médicale d’Australie) et à la Loi sur la prévention de la cruauté envers les animaux (1986). Au total, 24 rats Dark Agouti femelles (âgés de 8 à 9 semaines) ont été utilisés pour cette étude. Les groupes exp?…

Representative Results

L’enregistrement des potentiels d’action composés évoqués (ECAP, Figure 3A, B) immédiatement après la chirurgie est une technique qui peut être utilisée pour aider à confirmer le placement correct du nerf dans le canal de la matrice, et que la stimulation est efficace pour activer le nerf vague. Dans la figure 3, des rats agouti noirs femelles (âgés de 8 à 9 semaines) ont été implantés avec le résea…

Discussion

Cette méthode de chirurgie implantaire VNS abdominale et de stimulation chronique du nerf vague et d’enregistrement des ECAP a été utilisée avec succès et bien tolérée pendant 5 semaines chez le rat après l’implantation 10,15,16. La rétraction de l’estomac, du foie et de l’intestin pour avoir une bonne vue de l’œsophage et du nerf vague est l’une des étapes clés de la chirurgie. Une fois ces organes rétr…

開示

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Le développement de l’implant VNS abdominal de rat a été financé par la Defense Advanced Research Projects Agency (DARPA) BTO, sous les auspices du Dr Doug Weber et du Dr Eric Van Gieson par l’intermédiaire du Space and Naval Warfare Systems Center (contrat n° N66001-15-2-4060). Les recherches présentées dans cette publication ont été soutenues par le Fonds d’incubation de l’Institut bionique. Le Bionics Institute reconnaît le soutien qu’il reçoit du gouvernement de Victoria par le biais de son programme de soutien aux infrastructures opérationnelles. Nous tenons à remercier M. Owen Burns pour la conception mécanique, le professeur John B Furness pour son expertise anatomique, le professeur Robert K Shepherd pour son expertise en interface périphérique, en neuromodulation et en enregistrement, Mme Philippa Kammerer et Mme Amy Morley pour l’élevage et les tests d’animaux, Mme Fenella Muntz et le Dr Peta Grigsby pour leurs conseils sur les soins postopératoires aux animaux, et Mme Jenny Zhou et l’équipe de fabrication d’électrodes de NeoBionica pour la production des réseaux VNS.

Materials

0.9% saline Briemarpak SC3050
Baytril Bayer
Betadine Sanofi-Aventis Healthcare
Buprelieve (Buprenorphine) Jurox
Data acquisition device National Instruments USB-6210
DietGel Boost (dietary gel supplement) ClearH2O
Dumont tweezer, style 5 ProSciTech T05-822
Dumont tweezer, style N7, self-closing ProSciTech EMS72864-D
Elmasonic P sonicator Elma
Hartmann's solution Baxter AHB2323
Hemostat ProSciTech TS1322-140
HPMC/PAA Moisturising Eye Gel Alcon
Igor Pro-8 software Wavemetrics, Inc
Isoflo (Isoflurane) Zoetis
Isolated differential amplifier World Precision Instruments ISO-80
Liquid pyroneg Diversey HH12291 cleaning solution
Marcaine (Bupivacaine) Aspen
Plastic drape Multigate 22-203
Rat vagus nerve implant Neo-Bionica
Rimadyl (Carprofen) Zoetis
Silk suture 3-0 Ethicon
Silk suture 7-0 Ethicon
SteriClave autoclave Cominox 24S
Sterile disposable surgical gown Zebravet DSG-S
Suicide Nickel hooks Jarvis Walker
Ultrapure water Merck Millipre Milli-Q Direct
Underpads Zebravet UP10SM
Vannas scissors ProSciTech EMS72933-01
Vicryl suture 4-0 Ethicon

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記事を引用
Hyakumura, T., Fallon, J. B., Payne, S. C. Implantation Surgery for Abdominal Vagus Nerve Stimulation and Recording Studies in Awake Rats. J. Vis. Exp. (203), e65896, doi:10.3791/65896 (2024).

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