Il taglio e il metodo di galleggiamento per tessuto paraffina-incastonato per il sezionamento
概要
Qui, presentiamo un protocollo per migliorare la paraffina sezionamento. Questo metodo combina taglio e mobile utilizzando una semplice camera termostatica per evitare il processo di trasferimento richiesto secondo il metodo convenzionale. Di conseguenza, l’efficienza e il numero di sezioni della paraffina intatti furono notevolmente migliorate.
Abstract
Sezionamento del tessuto paraffina-incastonato è ampiamente usato in istologia e patologia. Tuttavia, è noioso. Per migliorare questo metodo, diverse aziende commerciali hanno messo a punto sistemi di trasferimento di sezione complessa utilizzando acqua liquida. Per semplificare questa tecnologia, abbiamo creato un semplice metodo utilizzando attrezzature fatte in casa che combina taglio e galleggianti all’interno di una semplice camera termostatica; Pertanto, le sezioni immettere automaticamente il bagno d’acqua sulla superficie dell’acqua. L’ippocampo da cervelli di topo adulto, reni di topo adulto, cervelli embrionali del mouse e dello zebrafish adulto sono stati tagliati utilizzando paraffina convenzionale di sezionamento e il metodo proposto per il confronto. Analisi statistica dimostra che il nostro metodo migliorato salvato tempo e sezioni più alte qualità di prodotto. Inoltre, paraffina sezionamento di un esemplare intero in breve tempo è facile per gli operatori junior.
Introduction
Lo studio morfologico è importante nella ricerca biologica. Anche se la nuova tecnologia ha permesso ai ricercatori di osservare loro obiettivi direttamente dall’intero tessuto o organismi1,2,3, l’esemplare di taglio in sezioni sottili, seguirono dalla macchiatura, rimane il primario morfologia del metodo solo tessuto, ma anche proteine targeting direttamente nel tessuto. La microscopia chiara utilizza tre tipi di sezione: paraffina, congelato e semifini. Sebbene cryosectioning è comune per proteggere l’antigenicità del tessuto e la preparazione del campione è semplice, la morfologia del tessuto mantenuto è scadente e non adatto per sottile taglio4,5. Sezionamento di paraffina è il metodo più frequentemente utilizzato per l’esposizione di morfologia ben conservato. Come gli esemplari sono completamente disidratati e incorporati in cera, i blocchi di paraffina possono essere conservati a tempo indeterminato. Inoltre, paraffina sezionamento produce sezioni sottili che migliorare l’accesso della sonda biologico in ulteriori esperimenti e riducono la sovrapposizione di strati di cella nella direzione Z.
Tuttavia, paraffina convenzionale di sezionamento è noioso e richiede abilità dell’operatore. Sezioni della paraffina subiscono fissazione, disidratazione, incastonatura, taglio e galleggianti. È importante trasferire nastri sezione dal portalama a bagno d’acqua è necessaria, ma difficile per operatori junior. Specialmente in aria asciutta, i nastri di sezione torcerà elettricità statica e sono difficili da spiegare sulla superficie dell’acqua calda. Per migliorare la sezione qualità, inumidire la superficie di tessuto esposto tra microtomo lama passate, i blocchi di cera di raffreddamento immergendole in acqua con ghiaccio, o alzando l’umidità con un umidificatore vicino il microtomo sono consigliate6,7 . I più nuovi metodi per migliorare la paraffina sezionamento includono ibrido inclusione in paraffina, cryosectioning8e sezione commerciale trasferimento sistema assistenza9. Sebbene questi metodi migliorano parzialmente paraffina sezionamento velocità e qualità, fanno di sezionamento molto più ingombrante, e sistemi di trasferimento di sezione commerciale sono costosi.
In questo protocollo, dimostriamo come creare attrezzature passo dopo passo, semplice, economico e flessibile che possono essere collegata per il supporto della lama di un microtomo rotativo. Questa apparecchiatura è composta da un canale di sezione, un bagno di acqua e un riscaldatore con un interruttore di rilevazione di temperatura. Dopo il taglio, decine di sezioni fluiscono nella scanalatura della sezione e inserire il bagnomaria direttamente, così sta svolgendo automaticamente. Questo migliora l’efficienza di taglio di paraffina e rende questa tecnologia più conveniente. Utilizzando questo metodo, più adulti sezioni di hippocampal di topo, sezioni di rene di topo adulto, embrionale 15,5 sezioni giorno-vecchio (E15.5) del mouse del cervello e occhio di zebrafish adulto sezioni sono state raccolte in meno tempo e morfologicamente più intatto. Questo metodo può essere utilizzato anche per altri campioni di tessuto che richiedono paraffina accelerata di sezionamento, evitando perdita di distinzione di sezione.
Protocol
Representative Results
Discussion
Per migliorare la paraffina sezione morfologia e risolvere il problema del tempo sprecato durante il sezionamento di paraffina convenzionale, abbiamo creato una paraffina migliore metodo che combina taglio e dispiegarsi di sezionamento. Questo metodo migliorato si basa su semplici attrezzature che comprende un canale di sezione, un bagno di acqua e un riscaldatore con un interruttore di rilevazione di temperatura. La barra multifunzione sezione entra nel bagno d’acqua attraverso il canale di sezione e si svolge automatic…
開示
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato supportato dal National Natural Science Foundation della Cina (Grant n. 31400936, 31460260) e il Natural Science Foundation di Jiangxi Provincia della Cina (20171BAB215020). Ringraziamo anche il programma congiunto tra Università di Nanchang e Queen Mary University of London per sostenere questo lavoro.
Materials
| Incubator | Boekel Scientific | 133000-2 | |
| Ethanol | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 64-17-5 | |
| Xylene | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 1330-20-7 | |
| Paraplast | Leica | 39601006 | |
| Heated Paraffin Embedding Module | Leica | ||
| Commercial acrylic board | |||
| Trichloromethane | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 67-66-3 | |
| Tubular electric heating element(12V 200W) | |||
| Temperature controller(12v 120w) | Mingsuo | XH-W3002 | |
| Rotary microtome | Leica | ||
| Neutral silicone sealant | Link the water channel with the microtome knife holder | ||
| Voltage transformer | Dearll | S-250-12 | |
| Disposable blade | Accu-Edge | 4689 | |
| Hematoxylin | Baso Diagnostics Inc. | BA-4025 | |
| Eosin | Baso Diagnostics Inc. | BA-4025 | |
| Microslide | Sail Brand | 7105 | |
| Neutral balsam | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 10004160 | |
| Coverslip | Citoglas | 10212424C | |
| Microscope | Carl Zeiss | ||
| Hydrochloric acid | Xilong Chemical | 7647-01-0 | |
| Water bath for paraffin sections | Leica | ||
| HistoCore Arcadia C - Cold Plate | Leica | ||
| paraffin repellent spray | Thermo Scientific | 9990420 |
参考文献
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