To study the mechanism of lipid utilization in yolk sac membranes during the late stages of avian embryonic development, we established a primary Japanese quail embryonic endodermal epithelial cell culture system.
أنشأنا الظهارية نموذج خلية ثقافة الأديم الباطن (EEC) لدراسة وظيفة بعض الأنزيمات والبروتينات في التوسط في استخدام المواد الغذائية التي أجنة الطيور خلال التنمية. وحضنت المخصبة بيض السمان اليابانية عند 37 درجة مئوية لمدة 5 أيام ثم صفار جمعت أغشية الكيس (YSM) لإنشاء نظام ثقافة الجماعة الاقتصادية الأوروبية. نحن عزل طبقة الأديم الجنينية من YSM، وشرائح الغشاء إلى 2-3 قطع ملم ويهضم جزئيا مع كولاجيناز قبل البذر في لوحات ثقافة 24-جيدا. وEECS تتكاثر من النسيج ونحن على استعداد للدراسات ثقافة الخلية. وجدنا أن EECS كان الخصائص المميزة للYSM في الجسم الحي، على سبيل المثال، وتراكم قطرات الدهون، تعبيرا عن ستيرول O-ناقلة الأسيل والليباز البروتين الدهني. علاج الهضم جزئية زيادة كبيرة في معدل نجاح ثقافة السوق الأوروبية المشتركة. الاستفادة من EECS، أثبتنا أن التعبير عن SOAT1 ينظمها المخيم دبروتين كيناز ependent مسارا ذات الصلة. هذا النظام الثقافة السمان EEC الياباني الأساسي هو أداة مفيدة لدراسة نقل الدهون الجنينية وتوضيح دور الجينات المسؤولة في التوسط في استخدام المواد الغذائية في YSM أثناء التطور الجنيني الطيور.
المورد الغذائي الرئيسي للجنين الطيور هو صفار البيض، ويتألف من 33٪ والدهون، والبروتين 17٪، و 1٪ رماد. 1 أثناء التطور الجنيني، غشاء الكيس المحي (YSM) ينمو من داخل تجويف البطن الجنينية ويغطي تدريجيا صفار البيض سطح. ابتداء من اليوم الجنينية 2، يتم زيادة التعبير الجيني المرتبط التمثيل الغذائي للدهون والأوعية الدموية تدريجيا في YSM، وYSM يتطور ببطء التوقعات مثل الزغب. 8،9 هذه التوقعات زيادة امتصاص المواد الغذائية صفار البيض لدعم التطور الجنيني. وYSM هو الأنسجة خارج الجنين الذي يحتوي على ثلاث طبقات جرثومية، الأديم، الأديم المتوسط والأديم الظاهر 14 في الأديم الظاهر الكيس المحي يواجه زلال والروابط مع الغشاء المحي لتغطية بلطف الكيس المحي. وتواجه الخلايا الظهارية الأديم الباطن مباشرة نحو صفار البيض وتكون بمثابة بوابات استخدام المغذيات. 6 ويوسع YSM، الخلايا الظهارية الأديم الباطن (EECS) يمكن تقسيمها من حالات العسر الشديده وظيفة إلى مجموعتين، منطقة المحي والوعائية للمنطقة. 7
وتتكون منطقة المحي من خلايا الأديم الباطن وغير بعيد من الجنين. وتتكون منطقة وعائية من خلايا أرومية متوسطة ويغطي EECS متباينة مع الأوعية الدموية والأنسجة الضامة. بعد يوم الجنينية 5، وتغطي صفار البيض تماما من الأديم الظاهر والأديم الباطن من YSM ومنطقة الأوعية الدموية قد نمت بسرعة. وYSM تمتص، recomposes والنشرات الدهون (كما الصفار المستمدة منخفضة جدا كثافة البروتين الدهني) والبروتينات في نظام الدورة الدموية الجنينية. 9، 2 لذلك، أنشأنا السمان الجنينية النظام الياباني الأساسي الأديم الباطن الظهارية زراعة الخلايا، لدراسة آليات الدهون استخدام في YSM أثناء التطور الجنيني الطيور.
الدهون مثل الدهون الثلاثية، ليستين، فوسفورية واستر الكولسترول (CE) هي مصادر الطاقة الأولية للأجنة الطيور. في المراحل المبكرة من التطور، والدهون صفار هي جomposed من 1.3٪ فقط م، وترتفع إلى 10-15٪ في منتصف المدة من التطور الجنيني الطيور 3، ويتم تصنيع 11. استر الكولسترول من الكولسترول بنسبة ستيرول O-ناقلة الأسيل 1 (SOAT1) في YSM جنين الطيور. 4
شكل تخزين الكوليسترول هو CE، ويتم CE في البروتينات الدهنية، ويتم نقل البروتينات الدهنية بواسطة الدورة الدموية إلى الأنسجة. 13 وقبل أسبوع يفقس هناك نمو السريع للأجنة الطيور. تقريبا يتم امتصاص 68٪ من محتويات الدهون المتبقية في صفار خلال هذه المرحلة. 10 الآلية التي صفار وتستخدم الدهون يمكن توضيحها من خلال نموذج البحث EEC. وتم إنشاء بروتوكول ثقافة EEC الدجاج لتحقيق هذا الهدف البحوث. 2، 9 ومع ذلك، ويرجع ذلك إلى انخفاض معدل النجاح من إإكسبلنتس الأنسجة، هناك حاجة إلى تحسين إجراءات زراعة الخلايا الجماعة الاقتصادية الأوروبية لدراسة وظيفة بعض الأنزيمات والبروتينات في التوسط في استخدام المواد الغذائية من قبل أجنة الطيور خلال التنمية.
لأن النظام الثقافة السابق سوى نجاح محدود، هناك حاجة إلى نظام ثقافة أفضل. اليابانية الأديم السمان YSM يتطلب العلاج مع الإنزيمات المحللة للبروتين مثل كولاجيناز لتخفيف تقاطعات خلية خلية لتحقيق أداء أفضل نمو في إإكسبلنتس فيفو السابقين. وتشير البيانات المتوفرة لدينا أن أ…
The authors have nothing to disclose.
ويدعم التمويل لتطوير البروتوكول الحالي بشكل خاص "الهدف لخطة جامعة أعلى" من جامعة تايوان الوطنية، تايوان (منحة ID-104R350144)، وكذلك وزارة العلوم والتكنولوجيا في تايوان (ID المنحة: MOST 104 -2313-B-002-039-MY3). نخص بالشكر مركز للتكنولوجيا الحيوية من جامعة تايوان الوطنية لتوفير غرفة الحيوان والفضاء مختبر لدراسة الحالية.
Dulbecco's Modified Eagle Medium | Gibco by Life technologies | 12800-017 10 X 1 L | For wash the EECs pellets |
D-MEM/F-12 | Gibco by Life technologies | 12400-024 10 X 1 L | As the basal medium in culturing EECs |
NBCS | Gibco by Life technologies | 16010-159 | As the supplyment serum in culturing EECs |
Pen-Strep Ampho. Solution | BI (Biological Industries) | 03-033-1B 100ml | For attenuating the possible infection |
Collagenase Type IV | Gibco by Life technologies | 17104-019 1g | Collagenase is a protease with specificity for the bond between a neutral amino acid (X) and glycine in the sequence Pro-XGly-Pro. As the protease for dissociation of cells from primary tissue. |
24 well plate | FALCON® | REF-353047 | For EECs to attach and extension |
50 ML PP centrifuge tubes | Corning® CentriStarTM | 430829 | For transportion of membranes and enzyme digestion |
50ML Conical bottomed Tube with Cap | PRO TECH | CT-50-PL-TW | For transportion of membranes and enzyme digestion |
Reciprocal shaking bath | DEAGLE | SB302 | For better enzymatic digestion on membranes |