Analyse Murine Schwann Zell Entwicklung entlang wachsenden Axone
概要
Hier beschreiben wir eine Schwann-Zellen (SC) Migration Assay, in dem SCs sind in der Lage zu entwickeln entlang erstreckt Axone.
Abstract
Die Entwicklung der peripheren Nerven ist eine faszinierende Prozess. Neuronen senden Axone um spezifische Ziele, die Menschen sind oft mehr als 100 cm vom soma des Neurons innervieren. Neuronale Überleben während der Entwicklung hängt Target-Wachstumsfaktoren, sondern auch auf dem Träger von Schwann-Zellen (SCs). Zu diesem Zweck sind SC umhüllen Axone vom Bereich des neuronalen Soma (oder der Übergang von der zentralen zu peripheren Nervensystem) auf der Synapse oder neuromuskulären Verbindung. Schwann-Zellen sind Derivate des Neuralleiste und migrieren als Vorprodukte entlang austretenden Axone bis die gesamte Axons mit SCs bedeckt ist. Dies zeigt die Bedeutung der SC Migration für die Entwicklung des peripheren Nervensystems und unterstreicht die Notwendigkeit, diesen Prozess zu untersuchen. Um SC Entwicklung zu analysieren, wird ein Setup benötigt, die neben den SCs auch ihrer physiologischen Substrat für Migration, das Axon. Aufgrund intrauterine Entwicklung <em> in vivo Zeitraffer-Aufnahmen, ist jedoch nicht in der Plazenta Wirbeltieren wie Maus möglich (mus musculus). Um dies zu umgehen, passten wir die Ganglion cervicale superius (SCG) Explantat-Technik. Bei der Behandlung mit nerve growth factor (NGF) SCG Explantate erweitern Axone von SC Vorstufen Migration entlang der Axone aus dem Ganglion an die Peripherie gefolgt. Der Vorteil bei diesem System ist, dass die SC aus einem Pool von endogenen SC und dass sie entlang ihrem eigenen physiologischen Axone, die zur gleichen Zeit wachsen migrieren abgeleitet sind. Dieses System ist besonders interessant, weil die SC Entwicklung entlang Axonen von Zeitraffer-Aufnahmen analysiert werden können, eröffnet weitere Möglichkeiten, Einblicke in SC Migration gewinnen.
Protocol
Representative Results
Discussion
Die Entwicklung des peripheren Nervensystems ist ein spannender Prozess. Wenn die Entwicklung beendet ist, werden Axone von SCs entlang der gesamten Länge, die beim Menschen können, oft mehr als 100 cm betragen umhüllt. Zu diesem Zweck die richtige Anzahl der benötigten SCs muss während der Entwicklung festgelegt und die SCs müssen auch entlang bewegen erstreckt Axone an den Rand, um die vollständige axonalen Abdeckung zu gewährleisten. Dies gilt für myelinisierten sondern auch für unmeylinated Axone. In beide…
開示
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Wir wollen Urmas Arumae für die Freigabe eines Kollagen-Protokoll und Jutta Fey und Ursula Hinz für hervorragende technische Unterstützung danken. Darüber hinaus wollen wir Christian F. Ackermann, Ulrike Engel und das Nikon Imaging Center an der Universität Heidelberg und auch Joachim Kirsch für die freundliche für das Video shoting helfen, danken. Die Arbeit wurde teilweise durch die Deutsche Forschungsgemeinschaft (SFB 592) gefördert.
Materials
| Name of Reagent/Material | Company | Catalogue Number | コメント |
| 10x MEM | Gibco | 21430 | |
| Sodium Bicarbonate (7.5%) | Gibco | 25080 | |
| Glutamine | Gibco | 25030 | |
| NaOH | Merck | 109137 | |
| NGF | Roche | 1058231 | R&D#556-NG-100 |
| Neurobasal Medium | Gibco | 21103 | |
| B27 Supplement | Gibco | 17504 | |
| antibiotics | Gibco | 15640 | |
| d-PBS | Gibco | 14040 | |
| insect needles | FST | 26002-20 | |
| syringe needle | Braun | BD # 300013 | |
| 8 well chamber slide | Lab tek | 177402 |
参考文献
- Ebendal, T., Rush, R. A. . Use of collagen gels to bioassay nerve growth factor activity. IBRO Handh, (1989).
- Heermann, S., SchmÃcker, J., Hinz, U., Rickmann, M., Unterbarnscheidt, T., Schwab, M. H., Krieglstein, K. Neuregulin 1 type III/ErbB signaling is crucial for Schwann cell colonization of sympathetic axons. PloS One. 6 (12), e28692 (2011).
- Zuo, Y., Lubischer, J. L., Kang, H., Tian, L., Mikesh, M., Marks, A., Scofield, V. L. Fluorescent proteins expressed in mouse transgenic lines mark subsets of glia, neurons, macrophages, and dendritic cells for vital examination. The Journal of Neuroscience. The Official Journal of the Society for Neuroscience. 24 (49), 10999-11009 (2004).
- Levi-Montalcini, R., Booker, B. EXCESSIVE GROWTH OF THE SYMPATHETIC GANGLIA EVOKED BY A PROTEIN ISOLATED FROM MOUSE SALIVARY GLANDS. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 46 (3), 373-384 (1960).
- Meintanis, S., Thomaidou, D., Jessen, K. R., Mirsky, R., Matsas, R. The neuron-glia signal beta-neuregulin promotes Schwann cell motility via the MAPK pathway. Glia. 34 (1), 39-51 (2001).
- Yamauchi, J., Miyamoto, Y., Chan, J. R., Tanoue, A. ErbB2 directly activates the exchange factor Dock7 to promote Schwann cell migration. The Journal of cell biology. 181 (2), 351-365 (2008).
- Anton, E. S., Weskamp, G., Reichardt, L. F., Matthew, W. D. Nerve growth factor and its low-affinity receptor promote Schwann cell migration. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (7), 2795-2799 (1994).
- Mahanthappa, N. K., Anton, E. S., Matthew, W. D. Glial growth factor 2, a soluble neuregulin, directly increases Schwann cell motility and indirectly promotes neurite outgrowth. The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 16 (15), 4673-4683 (1996).
- Yamauchi, J., Chan, J. R., Shooter, E. M. Neurotrophins regulate Schwann cell migration by activating divergent signaling pathways dependent on Rho GTPases. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101 (23), 8774-8779 (2004).
- Gumy, L. F., Bampton, E. T. W., Tolkovsky, A. M. Hyperglycaemia inhibits Schwann cell proliferation and migration and restricts regeneration of axons and Schwann cells from adult murine DRG. Molecular and Cellular Neurosciences. 37 (2), 298-311 (2008).
- Sakaue-Sawano, A., Kurokawa, H., Morimura, T., Hanyu, A., Hama, H., Osawa, H., Kashiwagi, S. Visualizing spatiotemporal dynamics of multicellular cell-cycle progression. Cell. 132 (3), 487-498 (2008).
- Park, D., Don, A. S., Massamiri, T., Karwa, A., Warner, B., MacDonald, J., Hemenway, C. Noninvasive imaging of cell death using an Hsp90 ligand. Journal of the American Chemical Society. 133 (9), 2832-2835 (2011).
- Shcherbo, D., Souslova, E. A., Goedhart, J., Chepurnykh, T. V., Gaintzeva, A., Shemiakina, I. I., Gadella, T. W. J., Lukyanov, S., Chudakov, D. M. Practical and reliable FRET/FLIM pair of fluorescent proteins. BMC Biotechnology. 9, 24 (2009).
