高效固相多肽合成的官能双肽三聚体,利用“安全赶上”HMBA树脂裂解过程的描述。
1962年,RB梅里菲尔德出版的第一个过程,作为一种新的路由使用的固相多肽合成,高效合成肽。很快就证明了这种技术的优势在其溶液相在时间和劳动的前身。关于固体支持性质的改善,保护群体的就业和耦合方法在过去的五十年只增加了梅里菲尔德的原系统的有效性。今天,使用中银为基础的保护和基地/亲核裂解树脂战略或基于FMOC-保护和酸性裂解树脂战略,率先由RC谢泼德,是最常用的用于合成多肽1。
梅里菲尔德的固体支持战略的鼓舞下,我们已经制定了一个组装官能双肽,这是本文所述的中银/叔丁基固相合成策略。使用固相合成比较牛逼O解决方案相方法不仅有利于梅里菲尔德1所述的时间和劳动,但也允许在双肽库的合成更大的方便。我们在这里展示的综合集成了最终的卵裂阶段,使用两个步骤“安全赶上”机制,从哌嗪二酮形成树脂官能双肽释放。
双肽刚性,螺梯双氨基酸,能在可预见的和可设计的单体单位和每个单体之间的连接的类型和立体控制的方式,定位功能的低聚物。每双氨基酸是1立体纯净,循环支架包含两个氨基酸(与α-氨基甲酸)3,4。我们的实验室目前正在调查横跨多种领域,包括催化,蛋白质相互作用和N的潜在功能双肽anomaterials。
这里提供了一个双氨基酸建筑块,采用常见的固相多肽合成技术的功能之二肽合成方法合成方法。单体合成的“反-4-羟脯氨酸3这些”PRO4的积木是高度可扩展的,并已成功完成海因阶段在600毫摩尔(234克)规模(未出版)。一旦手单体,采用固相技术提供了比我们目前的解决方案相方法,通过消除反应的工作和中间纯化需要更快速的双肽合成方法。
在固相合成的主要挑战是合成的进展情况和解决问题的,因为没有中间隔离的诊断。这导致许多比色法测试的发展,包括识别,如果自由胺(凯泽测试10)或免费hydroxYLS(甲基红试验7)暴露树脂。不幸的是,常用的凯撒测试10是在我们的固相合成由于二级胺或附加到一个季碳胺几乎独占使用一般不适用。为在HMBA树脂评估的其他选项包括测试分裂使用,如肼11,定量Fmoc保护裂解紫外/可见1,11监测亲核,捕获和分析传入激活化合物。
在固相合成的另一个被忽视的问题是重复操作所需要的合成步骤的性质。这是头脑,强烈建议使用电子表格或清单时执行任何手动固相多肽合成。
使用比较常见的α-氨基酸的固相合成二肽的困难,包括由于立体欣潜力更加困难接头需要上树脂哌嗪二酮封drance,同时deprotections(BOC /的TBU; CBZ / TBU)。另一个困难在于实现从树脂相比更常规的手段时,使用这个“安全陷阱”的方法,定量释放。考虑到这些因素,这是非常可能的,这种方法的进一步优化,可以达到目前的努力是我们小组正在改善这里介绍的方法。
The authors have nothing to disclose.
作者扎卡里Z.的布朗博士和珍妮弗Alleva想感谢本固相合成技术和有益的讨论马修佛罗里达州帕克的初步发展。这项工作是支持国防威胁降低局(国防部DTRA)(HDTRA1-09-1-0009)和由Cephalon公司的支持霍斯特·威策尔奖学金奖
Name | Company | Catalogue Number | コメント |
HMBA-Am Resin | NovaBiochem | 855018 | |
MSNT | NovaBiochem | 851011 | |
NMI | Sigma-Aldrich | 336092 | Toxic, Corrosive |
DCM | Sigma-Aldrich | D65100 | Carcinogenic |
Anhydrous DCM | Acros | 34846 | Carcinogenic |
33% Hydrogen Bromide in Acetic Acid | Sigma-Aldrich | 248630 | Toxic, Corrosive, Fumes when open |
DIPEA | Sigma-Aldrich | 387649 | Flammable, Toxic, Corrosive |
DMF | Fisher Scientific | AC27960 | Flammable, Toxic |
Anhydrous DMF | Acros | 34843 | Flammable, Toxic |
HOAt | GenScript | C01568 | |
DIC | Acros | BP590 | Flammable, Toxic, Corrosive |
TFA | Sigma-Aldrich | T6508 | Toxic, Corrosive |
TIPS | Acros | 21492 | Flammable, Toxic |
Piperidine | Sigma-Aldrich | 104094 | Flammable, Toxic, Corrosive |
HATU | GenScript | C01566 | Toxic |
NMP | Acros | 36438 | Toxic |
DMAP | NovaBiochem | 851055 | Toxic |
Methyl Red | Sigma-Aldrich | 250198 | |
THF | Sigma-Aldrich | 401757 | Flammable, Toxic, Peroxide Forming |
Pyrrolidine | Sigma-Aldrich | P73803 | Flammable, Toxic, Corrosive |
Dimethyl Sulfoxide | Fisher | D1281 | |
SPPS Reaction Vessels | Grace | 211108 | |
LCMS | Agilent | 1200 Series | |
Semi-Prep LC | Hewlett Packard | 1100 Series | |
Lyophilizer | Labconco | 7934027 | |
Rotovapor | Buchi | R-210 Series | |
Argon | Airgas | AR PP300CT |