Здесь мы создали метод для тестирования на наркотики эффективности с хирургической образцов опухолей головного мозга, называемый "метод эксплантатов опухоли". С помощью этого метода мы можем оценить эффективность препарата, не нарушая микроокружение солидных опухолей. Для проверки надежности этого метода, мы описываем репрезентативные данные с нашими глиомы образца получавших текущий первой линии химиотерапевтического агента, темозоломида.
Текущей терапии злокачественной глиомы лишь паллиативный эффект. Для лечебных развития, одним препятствием является несоответствие эффективность определяется текущей эффективность препарата испытания и эффективность на пациентах. Таким образом, новые и надежные методы оценки эффективности лекарств гарантия в доклинической фазе. В пробирке культуру опухолевых тканей, в том числе клеточных линий, имеет существенные фенотипические, генетические и эпигенетические изменения в раковых клетках, вызванных искусственным среду клеточной культуры, которая могут не соответствовать биологии оригинальной опухоли на месте. Ксенотрансплантата модели с иммунодефицитных мышей также имеют ограничения, то есть отсутствие иммунной системы и межвидовые генетические и эпигенетические различия в микроокружения. Здесь мы демонстрируем новый метод использования хирургических образцов злокачественной глиомы, как недиссоциированных блоков опухоли для оценки эффективности лечения. Для проверки этого метода, данные с текущей первой линии химиотерапевтического агента, темозоломида (ТМЗ), описаны.
Мы использовали свежих удалены хирургического образца злокачественной глиомы для наших экспериментов. Мы провели внутриопухолевые инъекции ТМЗ или других лекарств-кандидатов, с последующей инкубацией и анализ хирургических образцов. Здесь мы стремились установить опухоли методом эксплантатов ткани в качестве платформы для определения эффективности новых противораковых терапии, так что мы сможем преодолеть, по крайней мере, некоторые из существующих ограничений и заполнить существующий разрыв между текущим экспериментальным данных и эффективность на опухолевые фактического пациента. Этот метод, возможно, может ускорить выявление новых химиотерапевтических препаратов для твердых лечения рака.
Существует разрыв между эффективность препарата в текущем доклинических экспериментальных моделях и эффективность у пациентов. В частности, в области исследования опухоли головного мозга, новые и надежные методы необходимы, которая помогла бы заполнить существующий разрыв между наркотиками оценки с существующими методами и эффективность у пациентов. Анализ описанных в данном исследовании, является дополнительным активом, если не решение, чтобы облегчить заполнение несоответствие экспериментальных данных и результатов больных.
В культурах пробирке ячейки преимущественно расширить некоторые типы опухолевых клеток независимо от условий культивирования, и представляют собой лишь субпопуляции всю опухоль. 5 Кроме того, генетические и фенотипические преобразовании искусственного расширения ячейки происходит и неизбежно при долгосрочных культурах клеток . Одним из основных препятствий для лечения злокачественной глиомы является неоднородность опухолевых клеток, как в одной опухоли, а также между образцов опухоли 6, 7. Таким образом, селективное обогащение определенной популяции опухолевых клеток, вне зависимости от того или иного типа, не могут быть соответствующие средства, чтобы определить эффективность любых химиотерапевтических агентов на гетерогенных опухолевых клеток. 8 9 Любое животное модель опухоли головного мозга происходит от субпопуляции опухолевые клетки пролить свет на эффективность препарата субпопуляции, но не всю опухоль.
Некоторые ограничения, с другой стороны, все еще остаются в этой опухоли методом эксплантов. Одним из таких ограничений является относительно короткий период лечения. Поскольку злокачественные опухолевые клетки считаются приобретают устойчивость к большинству, если не все, терапии с течением времени, входного контроля краткосрочного роста опухолевых клеток, возможно, не отражает долгосрочный прогноз пациента, как это было недавно сообщили, с анти- ангиогенных агента, бевацизумаб 10. Таким образом, улучшение протокола для этого эксплантов анализа сохранить ткани в течение длительного времени требуется в дальнейших исследованиях. Другой вопрос заключается в специфическом действии испытания препарата на SCLTC в опухоли. Учитывая, что SCLTC относительно устойчивы к текущей терапии злокачественной глиомы, выявление новых противораковых препаратов, которые мощно искоренению SCLTC является оправданным. В этой связи мы в настоящее время стремятся объединить эту эксплантов анализа с последующим в пробирке эксперименты, такие как neurosphere формирования анализа (данные не приведены). Мы ожидаем, чтобы узнать больше о эффектами, если таковые имеются, наркотиков кандидат на SCLTC через эти объединенные анализов. Наконец, с помощью небольших блоков образцов опухоли могут не отражать всего населения опухолевых клеток, как и в случае с обычными опухолевых клеток линий или первичных культур из хирургических образцов. Эти вопросы в сторону, сохраняя опухоли стромы, в том числе сосудистых нишу, полезно для характеристики экологических факторов на клетки опухоли. Таким образом, этот анализ может иметь потенциал для оценки любого терапевтических стратегий в рамках более физиологически соответствующие условия.
Здесь мы создали тест для тестирования эффективности препарата с эксплантов хирургических образцов GBM. На самом деле, с тестируемым хирургических образцов, мы обнаружили, что непосредственным впрыском ТМЗ уменьшает распространение в GBM образцов. Этот метод ткани эксплантов теоретически применимы и к другим солидным раком и обеспечивает активов, чтобы определить эффективность препарата на опухолевые пациента, который, мы надеемся, поможет нам избежать очередного провала клинических испытаний для рака.
The authors have nothing to disclose.
Американское онкологическое общество (MRSG-08-108-01), Винсент Дж. Сгро / Американской ассоциации опухоли головного мозга, и семьи Хана, ибо я Накано.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
Fetal Bovine Serum, Qualified, Heat-Inactivated | GIBCO | 16140-071 |
D-MEM/F-12 (1X) Liquid 1:1 | Invitrogen | 10565-042 |
Agar-Agar Purified, Granulated | EMD | 1.01614.1000 |
DPBS for staining | Invitrogen | 14190 |
Hematoxyllin | Richalrd allan sci | 7211 |
10% w/v formalin Caspase-3 | Ricca chemical company | 3810 |
Caspase-3 | R&D systems | AF835 |
Ki67 | Dako | 15626 |
DMSO | Sigma | D2650 |
Envision system- anti-mouse | Dako | 2012-07 |
Envision system- anti-rabbit | Dako | 2011-12 |
DAB-kit | Vector Lab. | SK-4100 |
Table 1. Materials.
Name of the equipment | Company | Catalogue number |
6 Well Plate | Greiner-bio one | 657160 |
Petri dish | VWR | 25384-302 |
Serological pipette | Axygen | |
Filter tips | USA scientific | |
500 μm polyester mesh Netwell insert | Costar | 3480 |
Matrigel Matrix | BD Biosciences | 354230 |
BD 10 mL syringe | BD biosciences | 309604 |
Hypodermic needle Aluminum Hub. | Tyco Health Care | 2000029 |
Tissue culture flask | Corning | |
Centrifuge tubes | Basix | 5539800 |
Thin wall tubes | Eton | 1107A |
Surgical Blade stainless steel | Feather | 2976#10 |
Insulin Syringe | Comfort point | 26027 |
50mL flat top screw cap tube | Basix | 5539802 |
Dissection microscope | Tritech | |
Fluorescence microscope | Olympus | DP-72 |
Forcep | Fisher Sci |
Table 2. Equipment.