ליים מחלות מחקר מחקרים לעיתים קרובות דורשים דור של קרציות נגוע הפתוגן Borrelia burgdorferi, תהליך זה לוקח בדרך כלל מספר שבועות. כאן אנו מדגימים microinjection מבוססי זיהום סמן הליך זה יכול להתבצע תוך שעות ספורות. אנחנו גם להדגים שיטה immunofluorescence עבור בלוקליזציה באתרו של B. burgdorferi בתוך קרציות.
Abstract
מחלת ליים נגרמת על ידי זיהום עם הפתוגן החיידק Borrelia burgdorferi, אשר נשמר בטבע על ידי מחזור קרציות מכרסם זיהום 1. מודל סמן נישאים Murine 2 פותחה ללמוד מחלת ליים במעבדה. בעוד קרציות נאיבי יכול להיות נגוע ב burgdorferi מאכילים אותם על עכברים נגועים, תהליך הנשירה לוקח מספר שבועות עד חודשים כדי להשלים. לכן, פיתוח מהיר ויעיל יותר זיהום טכניקות סמן, כגון הליך מבוסס microinjection-, הוא כלי חשוב לחקר מחלת ליים 3,4. ההליך דורש שעות רק כדי ליצור קרציות נגועות ומאפשר שליטה על אספקת כמויות שוות של שהחיידקים במדגם של קרציות. הדבר חשוב במיוחד כמו דור ב ' קרציות burgdorferi נגועים על ידי תהליך טבעי האכלה באמצעות עכברים נכשל כדי להבטיח שיעור זיהום 100% ואפשרות תוצאות וריאציה של הנטל בין הפתוגן קרציות נמאס. יתר על כן, microinjection ניתן להשתמש כדי להדביק קרציות עם B. burgdorferi מבודד במקרים בהם הלחץ נחלש אינו מסוגל להקים זיהום בעכברים ולכן לא ניתן לרכוש באופן טבעי על ידי קרציות 5. טכניקה זו יכולה לשמש גם כדי לספק מגוון של חומרים ביולוגיים אחרים לתוך קרציות, למשל, נוגדנים ספציפיים או פעמיים תקועים RNA 6. במאמר זה נדגים את microinjection של קרציות nymphal עם במבחנה גדל ב burgdorferi. אנו גם מתארים שיטה לוקליזציה של פתוגנים מחלת ליים במעיים סמן באמצעות מיקרוסקופ immunofluorescence confocal.
Protocol
1. Microinjection של Nymphal קרציות קרצית scapularis 1. הכנת מחטים לפברק כמה מחטים microinjection ידי חימום ומושך 1 מ"מ צינורות זכוכית נימי (מכשירים העולם Precision) ב מכשיר micropipette חולץ זכוכית (Narishige). הסר …
Discussion
כאן אנו להדגים הליך microinjection המבוסס על זיהום מהיר ויעיל של קרציות קרצית nymphal עם הפתוגן חיידקי B. burgdorferi. אנחנו גם לתאר הליך immunofluorescence confocal לצורך זיהוי של B. burgdorferi במעיים סמן באתרם. למרות ההפגנה שלנו כרוך בטן nymphal, נהלים דומים חלים גם על שלבי ההתפתחות השני של…
開示
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
אנחנו מאוד מודים אנשי המעבדה פאל על הסיוע בהכנת ההפגנה. מחקר זה נתמך על ידי מענקים PHS AI076684 ו AI080615 מ-NIH / NIAID.
Barthold, S. W., Diego, C., Philipp, M. T., Samuels, D. S., Radolf, J. D. .Borrelia, Molecular Biology, Host Interaction and Pathogenesis. , 353-405 (2010).
Kariu, T., Coleman, A. S., Anderson, J. F., Pal, U. Methods for Rapid Transfer and Localization of Lyme Disease Pathogens Within the Tick Gut. J. Vis. Exp. (48), e2544, doi:10.3791/2544 (2011).