ロックされた核酸修飾オリゴヌクレオチドによるトランスフェクションおよび蚊細胞における標的遺伝子の変異

マラリア原虫、マラリアの原因物質は、毎年2億5千万以上の新しい感染症で、その結果感染したハマダラカ蚊の刺咬を介して送信されます。数十年にわたる研究にもかかわらず、マラリアに対するワクチンは、全く新しい制御戦略の必要性を強調し、まだありません。一つの革新的なアプローチが効果的にマラリア原虫の伝送を制御する遺伝子組み換え蚊の使用です。標的特異的変異を経由して蚊の細胞シグナル伝達経路の意図的な変化が、、寄生虫の開発^1を調節することが見出されている。これらの研究から、我々は、変換のための潜在的な遺伝子標的を同定するために始めることができます。標的変異誘発は、伝統的に標的遺伝子と大きなDNA分子間の相同組換えに頼っている。しかし、安定に形質転換細胞株の生成のためのこのような複雑なDNA分子の構築および使用は、コストと時間がかかり、非効率的です。したがって、ロックされた核酸修飾オリゴヌクレオチド（LNA – ONS）を使用しての戦略はエピソームおよび染色体DNAの遺伝子標的^（2レビュー）に人工的な単一の塩基置換を導入するための有用な代替手段を提供します。 LNA – ONを介した標的突然変異誘発は、酵母やマウスの^3,4の両方の培養細胞で目的の遺伝子に点突然変異を導入するために使用されています。我々は、LNA – ONSがハマダラカとハマダラカの細胞の両方において、緑色蛍光タンパク質（GFP）の発現に青色蛍光タンパク質（BFP）の式からスイッチの結果そのトランスフェクトされたエピソームターゲット内の単一のヌクレオチドの変化を導入するために使用できることをここに示す。この変換は、蚊細胞における標的遺伝子の効果的な変異導入がLNA – ONSによって媒介されることを初めて示し、この手法は、in vitroおよび in vivo で染色体ターゲットの突然変異誘発に適用される可能性があることを示唆している。