Dissociar as células de tipos de tecido específico requer parâmetros específicos para aggitation tecido para obter um volume elevado de viáveis, as células cultiváveis. A Miltenyi gentleMACS Dissociator otimiza essa tarefa com um protocolo simples e prática. Nesta publicação o uso deste aparelho no tecido nerual é explicado.
Dentro do sistema nervoso, centenas de tipos de células neuronais e gliais têm sido descritas. Cada tipo específico de célula no cérebro ou na medula espinhal tem um repertório de moléculas da superfície celular, ou determinantes moleculares, através do qual podem ser identificados e caracterizados. Atualmente, a identificação de células robustas e tecnologias de separação exige uma única célula preparações a serem gerados ao mesmo tempo, limitar a morte celular e destruição de proteínas de superfície característicos. O Dissociator gentleMACS, quando usado em combinação com tripsina ou kits papaína baseado dissociação, pode efetivamente e gentilmente dissociar o tecido cerebral, preservando epítopos do antígeno e limitar a perda de células. Preparação padronizada de uma única célula suspensões é conseguido usando Tubos C e otimizado, programas predefinidos gentleMACS. Uma vez gerados, de uma única célula suspensões podem ser tratados com conjugados monoclonais como Anti-Prominin-1 microesferas, que identificam progenitores neurais, ou purificado ainda mais usando Beads Remoção de mielina.
O Dissociator gentleMACS facilita a preparação padronizada de uma única célula suspensões de tecidos neurais em um sistema fechado. Kits tecido neural dissociação são otimizados para preservar epítopos de antígeno necessária para outras aplicações como reações imunoistoquímicas e separação de células imunomagnética 1-5. Neste protocolo, mostramos a dissociação gentil enzimática de cérebro de camundongo usando o Dissociator gentleMACS eo Neural Tissue dissociação Kit (P), resultando em 97% de células viáveis. 100 mg de rendimentos tecido neural entre 5×10 6 e 1×10 7 células, dependendo da idade do tecido hospedeiro. O alvo células Prominin-1 + foram isoladas usando Anti-Prominin-1 micro e posteriormente levados em cultura. O protocolo é mostrado para ser ainda mais eficaz com o uso adicional de Contas Remoção de mielina quando se trabalha com tecido neural derivado de ratos P7>.
The authors have nothing to disclose.