Dissociare cellule di tipi di tessuto specifico richiede parametri specifici per aggitation tessuto per ottenere un elevato volume di vitali, cellule coltivabili. Il Miltenyi gentleMACS dissociatore ottimizza questa operazione con un semplice protocollo pratico. In questa pubblicazione l'utilizzo di questo apparecchio sul tessuto nerual è spiegato.
All'interno del sistema nervoso, centinaia di tipi di cellule neuronali e gliali sono stati descritti. Ogni tipo di cellule specifiche del cervello o del midollo spinale ha un repertorio di molecole di superficie cellulare, o determinanti molecolari, attraverso i quali può essere identificato e caratterizzato. Attualmente l'identificazione delle cellule robuste e richiedono tecnologie di separazione a cella singola preparati da generare al tempo stesso limitare la morte cellulare e la distruzione delle proteine di superficie caratteristico. Il dissociatore gentleMACS, se usato in combinazione con tripsina o la papaina kit a base di dissociazione, può efficacemente e delicatamente dissociare tessuto cerebrale, preservando epitopi dell'antigene e limitare la perdita di cellule. Preparazione standardizzata di singola cellula sospensioni è ottenuta utilizzando tubi C e ottimizzato, programmi preimpostati gentleMACS. Una volta generato, cella singola sospensioni possono essere trattati con coniugati monoclonali come Anti-Prominin-1 microsfere, che identificano progenitori neurali, o ulteriormente purificato utilizzando perline di rimozione mielina.
Il dissociatore gentleMACS facilita la preparazione standardizzata di singole cellule sospensioni dai tessuti neurali in un sistema chiuso. Neurali del tessuto kit dissociazione sono ottimizzati per preservare epitopi antigene necessaria per ulteriori applicazioni, come immunostainings e la separazione delle cellule immunomagnetica 1-5. In questo protocollo si mostra la dissociazione dolce enzimatica di cervello di topo utilizzando il dissociatore gentleMACS e il tessuto neurale dissociazione Kit (P), ottenendo nel 97% cellule vitali. 100 mg di rendimenti tra il tessuto neurale 5×10 1×10 6 e 7 celle, a seconda dell'età del tessuto ospite. Il mirati Prominin-1 + sono state isolate le cellule utilizzando Anti-Prominin-1 microsfere e successivamente presi in cultura. Il protocollo è dimostrato di essere ancora più efficace con l'uso aggiuntivo di Perline rimozione mielina quando si lavora con i tessuti neurali derivate da topi P7>.
The authors have nothing to disclose.