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시험관 내 링 타입 E3 유비퀴틴 리가제의 기능적 특성화
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Functional Characterization of RING-Type E3 Ubiquitin Ligases In Vitro and In Planta
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시험관 내 링 타입 E3 유비퀴틴 리가제의 기능적 특성화

DOI:
10.3791/60533-v

•

10:27 min

•

December 05, 2019

•

, , , , , ,
1Department of Entomology, Plant Pathology and Nematology,University of Idaho, 2Department of Plant Sciences,University of Idaho

Capitoli

  • 00:04Titolo
  • 01:04Site-directed Mutagenesis
  • 02:29Recombinant Protein Purification and In Vitro Ubiquitination Assay
  • 03:40Agrobacterium-mediated Transient Protein Expression in Nicotiana benthamiana Leaves and In Planta Ubiquitination Assay
  • 06:36Establishing the Link Between Enzymatic Activity and Function In Planta
  • 07:27Results: In Vitro and In Planta Ubiquitination Assay
  • 09:20Conclusion

Summary

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이 원고의 목표는 RING 형 E3 유비퀴틴 리가제의 포괄적 인 생화학 및 기능 적 연구에 대한 개요를 제시하는 것입니다. 상세한 프로토콜을 갖춘 이 다단계 파이프라인은 테스트된 단백질의 효소 활성을 검증하고 활성을 작동하도록 연결하는 방법을 보여줍니다.

Tags

RING-type E3 Ubiquitin LigasesSite-directed MutagenesisIn Vitro Enzymatic ActivityIn Planta FunctionalityUbiquitination AssayRING DomainCys And His ResiduesPCRDpn1 DigestionPMAL-c2 VectorMBP TagSDS-PAGEPVDF MembraneWestern Blotting

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