È necessario avere un abbonamento a JoVE per visualizzare questo. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Saccharomyces cerevisiae Metabole labelen met 4-thiouracil en de kwantificering van gesynthetiseerd mRNA nieuw als een Proxy voor RNA Polymerase II activiteit
Capitoli
- 00:04Titolo
- 00:41Cell Culturing
- 01:374tU Labeling with S. pombe as a Spike-in
- 03:20RNA Extraction and DNase Treatment
- 04:30Thiol-specific Biotinylation of Newly Synthesized RNA
- 06:05Purification of Newly Synthesized Fraction from Total and Unlabeled RNA Using Streptavidin-coated Magnetic Beads
- 07:18Results: Quantification of Newly Synthesized mRNA as a Proxy for RNA Polymerase II Activity
- 08:52Conclusion
Het protocol hier beschreven is gebaseerd op het genoom-brede kwantificeren van nieuw samengestelde mRNA gezuiverd van gistcellen aangeduid met 4-thiouracil. Deze methode maakt het mogelijk om het meten van de mRNA-synthese rekken van mRNA verval en biedt dus een nauwkeurige meting van RNA polymerase II transcriptie.
