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Génération indépendante et dépendante de la sélection de CRISPR / Cas9-Meded Knockouts dans les cellules de mammifères
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Selection-dependent and Independent Generation of CRISPR/Cas9-mediated Gene Knockouts in Mammalian Cells
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Génération indépendante et dépendante de la sélection de CRISPR / Cas9-Meded Knockouts dans les cellules de mammifères

DOI:
10.3791/55903-v

•

11:35 min

•

June 16, 2017

•

, ,
1Cell Biology and Neuroscience,University of California, Riverside

Capitoli

  • 00:05Titolo
  • 00:57Transfection of CRISPER Component into Cultured Cells and Drug Selection
  • 02:31Isolation of Clonal Populations
  • 03:53Screening Candidates by Dot Blot
  • 06:30Screening Candidates by Colony PCR
  • 08:59Results: Knockout Cell Lines Generated by Two CRISPER/Cas9 Methods
  • 10:40Conclusion

Summary

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Les progrès récents dans la capacité de manipuler génétiquement les lignées cellulaires somatiques offrent un grand potentiel pour la recherche fondamentale et appliquée. Ici, nous présentons deux approches pour la production et le dépistage de knock-out créés par CRISPR / Cas9 dans des lignées cellulaires de mammifères, avec et sans utilisation de marqueurs sélectionnables.

Tags

CRISPR/Cas9Gene KnockoutNonhomologous End JoiningHomology-directed RepairT-REx-293 CellsTransfectionDrug SelectionClonal Isolation

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