Inmunohistoquímica (IHC) es una técnica utilizada para visualizar la presencia y localización de proteínas en los tejidos. Las larvas de Drosophila son particularmente susceptibles de IHC debido a la facilidad con que puede ser procesados para la tinción. Además, las larvas son transparentes, lo que significa que los tejidos pueden ser visualizados sin necesidad de disección.
En IHC, las proteínas se detectan en última instancia con los anticuerpos que se unen específicamente a “epitopes” dentro de la proteína de interés. Para preservar estos epítopos, los tejidos deben ser fijados antes de la tinción. Además, a fin de anticuerpos penetrar en las membranas, las células deben permeabilized con detergentes. Este artículo de video ofrece una vista detallada de los reactivos, instrumentos y procedimientos necesarios para la tinción de tejidos larvales disecados, incluyendo fijación, bloqueo y pasos de tinción. También es una demostración de tejido técnicas de montaje para microscopía de fluorescencia. Finalmente, se proporcionan ejemplos de la amplia gama de aplicaciones de estas técnicas (y algunas variaciones sobre ellos).
Procedura
Drosophila melanogaster es un organismo modelo ampliamente estudiado debido a su versatilidad y facilidad de uso. Inmunohistoquímica en preparaciones de larvas de Drosophila es un método valioso que puede proporcionar información sobre la presencia, localización y colocalización de proteínas. Este video cubre los métodos esenciales para la disección, fijación, bloqueo y montaje del tejido larvas de Drosophila y ejemplos de sus aplicaciones. <div …