在水培条件下测量 拟南芥 根上的细菌定植
Summary
植物促生长根际（PGPR）在根际的定植对其促生长作用至关重要。有必要规范细菌根际定植的检测方法。在这里，我们描述了一种可重复的方法，用于量化细菌在根表面的定植。
Abstract
测量 拟南芥 根上的细菌定植是植物-微生物相互作用研究中最常见的实验之一。为了提高可重复性，需要一种标准化的方法来测量细菌在根际中的定植。我们首先在水培条件下培养无菌 拟南芥 ，然后在根际中以 OD600 的终浓度 0.01 接种细菌细胞。接种后 2 天，收获根组织并在无菌水中洗涤 3 次，以去除未定植的细菌细胞。然后称重根部，并通过涡旋收集定植在根部上的细菌细胞。用磷酸盐缓冲盐水 （PBS） 缓冲液以梯度稀释细胞悬液，然后接种到 Luria-Bertani （LB） 琼脂培养基上。将平板在37°C下孵育10小时，然后对LB平板上的单个菌落进行计数并归一化，以指示定植在根上的细菌细胞。该方法用于在单相互作用条件下检测细菌在根际中的定植，具有良好的重现性。
Introduction
有定量和定性方法可用于检测单一细菌菌株的根际定植。对于定性方法，应使用组成型表达荧光的菌株，并且应在荧光显微镜或激光共聚焦仪器1,2下检查荧光分布和强度。这些策略可以很好地反映细菌原位定植 3，但它们在定量方面不如传统的平板计数方法准确。此外，由于在显微镜下只能显示部分根区的限制，有时可能会受到主观偏见的影响。
在这里，我们描述了一种定量方法，其中包括收集定植的细菌细胞并计数板上的细菌 CFU。该方法基于稀释和铺板，通过该方法可以计算从植物根部剥离的定植菌株，并且可以计算出根部上的总定植细菌数4,5。
首先，在水培条件下培养 拟南芥 ，然后在根际中以终浓度0.01 OD600接种细菌细胞。接种后 2 天收获感染的根组织，并用无菌水洗涤以去除未定植的细菌细胞。此外，收集定植在根上的细菌细胞，在磷酸盐缓冲盐水 （PBS） 缓冲液中稀释，并接种到 Luria-Bertani （LB） 琼脂培养基上。在37°C孵育10小时后，对LB平板上的单个菌落进行计数并归一化以确定定植在根上的细菌细胞。
该方法适用性强，重复性好，更适用于根际细菌定植的准确测定。
Protocol
Representative Results
Discussion
为了实现良好的可重复性，该协议的定植检测过程有四个关键步骤。首先，必须确保每个实验中接种的细菌细胞数量完全相同。其次，用无菌水控制未定植的细菌清洁强度也是必要的。第三，每个样品稀释过程在进行之前都需要进行涡旋，以使样品处于完全混合状态，以避免由于细菌的特性而导致的吸收误差，这些特性容易在微量离心管中下沉。因此，我们建议在每次吸收前使用涡旋仪混合细菌?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作由国家自然科学基金（32370135）、中国农业科学院创新计划（CAAS-CSAL-202302）、江苏省农林职业学院科技项目（2021kj29）资助。
Materials
| 6-well plate | Corning | 3516 | |
| Filter cell stainer | Solarbio | F8200-40µm | |
| Microplate reader | Tecan | Infinite M200 PRO | |
| Murashige and Skoog medium | Hopebio | HB8469-5 | |
| NaClO | Alfa | L14709 | |
| Phytagel | Sigma-Aldrich | P8169 | |
| Square petri dish | Ruiai Zhengte | PYM-130 | |
| Vortex Genie2 | Scientific Industries | G560E |
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