הקמה ויישום של מערכי מיקרו-ectrode סיבי פחמן להקלטות כרוניות וחריפות ב-Vivo

כל ההליכים הניסיוניים אושרו על ידי אוניברסיטת ברנדייס או אוניברסיטת וושינגטון טיפול בבעלי חיים והוועדה לשימוש. הנתונים המוצגים נאספו מחמוס אחד ונקבה אחת ועכבר זכר אחד. 1. הכנת סיבי פחמן וכלים הכנת סיבי פחמן מסחריים חותכים רצועות בגודל 8 ס”מ מחבילת הסיבים בגודל אפוקסי. מניחים את הרצועות במקביל כור היתוך ואופים בתנור ב 400 °C (6 שעות) כדי להסיר את האפוקסי מסיבים מסחריים. לאחר מכן, לאחסן את הסיבים האפויים בצלחת פטרי סטנדרטית או צינור חרוטי.הערה: סיבים בקוטר של 7 מיקרומטר שימשו. קבוצות אחרות השתמשו 4 סיבי מיקרומטר20,21. הכן קלטות להחזקת סיבים בודדים. השתמשו במדפסת תלת-ממד או בחותך לייזר ליצירת הקלטות ומחזיק הקלטת המשויך (ראו איור 2). תעמיסו את הסיבים על הקלטות. התחל על-ידי הנחת פיסת סרט דו-צדדית על שני הצדדים הארוכים של הקלטת, יישור קצה הקלטת עם הקצה הפנימי של הקלטת. מפרידים סיבים בודדים מהחבילה האפויה ומניחים אותם במקביל לצד הקצר של הקלטת, תוך שמירה על 2-3 מ”מ בין סיבים. יש להקפיד על להתאים 20-30 סיבים בכל קלטת. לאטום את הסיבים במקום על ידי הנחת סרט ברור מעל קלטת כפול מקל. הנח את הקלטות המלאות במחזיק הקלטות.הערה: עבור בונה מנוסה, מילוי קלטת אחת של סיבים ייקח ~ 1 שעה. עבור בונה טירון, תהליך זה צפוי לקחת ~ 1.5-3 שעות. יש עשר קלטות לקופסה, ושני מחזיקי קלטות יכולים להיכנס לתא התצהיר של פארילן. מצפים את הסיבים הבודדים עם פארילן C באמצעות תא תצהיר ואקום מסחרי. ריצה אחת נדרשת לציפוי. למדוד 2.3 גרם של פארילן עבור כל ריצה. שני מחזיקי קלטות מתאימים לתא בכל פעם. הליך הציפוי לוקח ~ 2 שעות לכל ריצה.הערה: מדידה של 2.3 גרם של פארילן C מספקת כ 1 מיקרומטר של ציפוי. סיבים מצופים ניתן לאחסן ללא הגבלת זמן. הכנת כלי מניפולציה סיבי פחמן עטפו חתיכה קטנה של סרט דבק גמיש סביב מחט 30 G, ויוצרים נקודה חדה אך גמישה עם סרט הדבקה.הערה: עטיפת קצה מחט בפרפילם, ומתיחת parafilm בכך, יוצרת אפקט דבק קל המאפשר למשתמש להרים ולתמרן סיבים בודדים. 2. עיצוב וימצאה בחר את עיצוב הג’יג המתאים הדרוש בהתבסס על המפרט של האלקטרודה שיש לבנות. זה יתבסס על מספר הערוצים הדרושים, יחד עם כל תוספות העיצוב.הערה: Jig מתייחס לבלוק המודפס בתלת-ממד המספק עוגן לאלקטרודות ולחיבורים חשמליים. צור או שנה את העיצוב הספציפי של הג’יג באמצעות תוכנת עיצוב (CAD) בעזרת מחשב. השתמש בחברת הדפסה תלת-ממדית או במעבדת היצרן המוסדי כדי להדפיס את הג’יגה באמצעות מדפסת תלת-ממד SLA ברזולוציה גבוהה. 3. הרכבת מערך המיקרו-ectרודe של סיבי הפחמן (CFEA) הערה: שלב זה לוקח ~ 2 שעות עבור בונה מנוסה ~ 6 שעות עבור בונה טירון. בצע את כל שלבי ההרכבה של CFEA ושלבי קשיית הסיבים תחת מיקרוסקופ סטריאו 10x. השלם את הרכבת CFEA בסביבה עם תנועה אווירית מינימלית, שכן הדבר עלול להפריע לתהליך הבנייה. בחר את הג’יג המתאים הדרוש לבניית האלקטרודה הרצויה. באמצעות חותכי חוט מתכת, לחתוך שתי חתיכות של חוט טונגסטן של קוטר 0.003 ב (76.2 מיקרומטר), על 7 ס”מ אורך. הזן כל חוט דרך הערוץ המתאים בקצה המחבר של הג’יג (GND ו- REF). להאכיל מספיק דרך עד שני הקצוות שווים באורך, ולאחר מכן לסובב אותם יחד כדי לאבטח אותם על הג’יג.הערה: עבור עיצוב אקוטי בן 16 ערוצים, ודא שחוט המתכת מתאים בתוך הרכס ב- jig.יש למרוח מלט דנטלי שנרפא UV כדי לאבטח את החוט. הקפד לא לקבל שום מלט שיניים בתוך הערוץ הפתוח כי החוט מוזן דרך.הערה: המשתמש צריך ללבוש הגנת עיניים סינון UV במהלך כל ההליכים הקשורים UV כדי למנוע נזק פוטנציאלי לעיניים. שרבים מטות ריפוי UV יש מסנני צפייה מובנים. באמצעות שרביט ריפוי UV, לרפא את המלט הדנטלי עבור 20 s. אבטחו את הג’יג במקצף התכשיטים באחת מזרועות הג’יג. כוון את הג’יג כך שאחד הפרצופים הצדדיים יהיה מקביל לקרקע. כוון את הג’יג ואת האגרטל מתחת למיקרוסקופ כך שקצה המחבר, האגן וקצה המשפך יתגלו. כוון את הג’יג כך שהמשפך יצביע הרחק מהמשתמש וקצה המחבר פונה לכיוון המשתמש. אסוף את כלי סיבי הפחמן ומחט חדה של 25 ג’י. מניחים קלטת עם סיבים מצופים פרילן-C על גיליון נייר לבן, צד סרט למעלה, כך הסיבים אינם ישירות על הנייר. השתמש במחט 25 G כדי לחתוך סיבי פחמן יחיד מתוך הקלטת. לעשות זאת על ידי הזזת קצה המחט נגד הקלטת שבה הסיבים שיש להסיר מגיח. אם בונים באמצעות חצי סיבים, לחתוך קצה אחד של הסיב כמתואר לעיל. לכוון את הסיבים כך שהוא ישר, באמצעות המחט, לחתוך את הסיבים לשניים על ידי חיתוך הסיבים נגד הנייר. על מנת לחתוך את החצי השני, אשר עדיין מחובר לקלטת, להחזיק את הקצה החופשי של הסיבים עם כלי סיבי פחמן שנעשה בעבר, ולאחר מכן להשתמש במחט כדי לחתוך את הסיבים עדיין מחוברים לקלטת כמתואר לעיל. אם בונים באמצעות סיבים מלאים, לחתוך קצה אחד של הסיב כמתואר לעיל. השתמש בכלי סיבי הפחמן שנעשה בעבר והחזק את הקצה החופשי של הסיבים שנחתכו זה עתה. באמצעות המחט, לחתוך את הקצה השני של הסיבים מן הקלטת. הרם את סיבי הפחמן באמצעות כלי סיבי הפחמן שנעשו בעבר. הרם את הסיבים כך קצה אחד יש כ 1 ס”מ של אורך מהכלי. השתמש בכלי סיבי הפחמן עם הסיבים המחוברים והזן את הקצה הקצר יותר של הסיבים דרך חתיכת המשפך מהאגן האמצעי של הג’יג. השתמש במיקרוסקופ כדי לדמיין. המשיכו להאכיל את הסיבים דרך משפך הג’יג עד שרוב אורך הסיבים יעבור (ראו איור 3A). להאכיל את החלק האחורי של הסיב דרך ערוץ זמין באמצעות כלי סיבי פחמן שנעשו בעבר. להאכיל את הסיבים דרך הגב עד כ 5 מ”מ של סיבים בולטים מאחור. גזור לגודל במידת הצורך (ראו איור 3B).הערה: אין להאכיל סיבים לערוצים המכילים את חוטי המתכת. מלא את שאר הערוצים בסיבים בצד אחד של הג’יג, בהתאם להוראות שניתנו לעיל.הערה: בעת הזנת סיבים לתוך המשפך, להאכיל מחצית הסיבים לתוך כל חלוקה של משפך, עם החצי הימני של הערוצים בחטיבה הימנית ואת החצי השמאלי של הערוצים בחטיבה השמאלית. כאשר הסיבים נמצאים במגע קרוב בתוך המשפך, יש חיכוך שלילי בין סיבים שמוביל סיבים קיימים או משך רופף או שבור תוך הזנת סיבים חדשים לתוך הג’יג. חלוקה זו לארבעה חלקים מספקת הקלה מסוימת, שכן הסיבים נשמרים בחבילות קטנות יותר עד לשלב מאוחר יותר. השתמש במצית גלגל ניצוץ סטנדרטי והעבר במהירות את הלהבה מעל הסיבים החשופים בקצה המחבר. ודאו שהבידוד של כל הסיבים יוסר בקצוות (ראו איור 3C).הערה: החלק של הסיבים שנחשפו ללהבה צריך להיראות מעט דק יותר משאר הסיבים. להאכיל את הסיבים הלהבה דרך הג’יג, כך החלק של הסיבים החשופים ללהבה הוא עכשיו בתוך הערוץ. ודאו שאין סיבים שבולטים בחלק האחורי של הג’יג (ראו איור 3D).הערה: השתמש בכלי סיבי הפחמן כדי לתפוס את הסיבים מתוך האגן ולהאכיל את הסיבים הלהבים דרך הג’יג. אין לגעת בחלק הסיבים החשופים ללהבה, שכן חלק זה שברירי יותר. החל מלט דנטלי UV נרפא על הסיבים באגן של ג’יג. מלאו את כל האגן כדי לכסות את פתחי הערוצים ואת פתיחת המשפך (ראו איור 3E). השתמש באור UV ולרפא את המלט הדנטלי במשך 20s. תרופה עבור 20 s נוספים אם מלט שיניים לא נרפא לחלוטין.הערה: ודא כי מלט השיניים לא לנסוע בתוך הערוצים. הסר את הג’יג מהמגפיים, הפוך אותו, ואבטח את הג’יג במתגפיים כפי שהובטח בעבר. ודא כי הצד המכיל את הסיבים הוא עכשיו עם הפנים כלפי מטה. מלאו את הצד הריק של הג’יג בסיבי פחמן בדיוק כמתואר לעיל. ברגע שלכל הערוצים יש סיבים, והסיבים מאובטחים עם מלט דנטלי, להסיר את הג’יג מן המצחס ולכוון את הג’יג, כך המשפך מצביע למטה. אבטח את הג’יג במקצה, כך שקצה המחבר יצביע למעלה. אסוף מחט חדת קצה של 25 G, מזרק 1 מ”ל, צבע מוליך כסוף, אפליקטורים עם קצה כותנה, מדלל צבע, מגבוני רקמות ומחבר הבמה המתאים.הערה: ודאו שהצבע המוליך הכסוף מעורבב היטב ומהווה פתרון הומוגני. אל תתנו לצבע להתייבש. ציירו 0.3 מ”ל של צבע כסף למזרק 1 מ”ל, ולאחר מכן חברו את מחט 25 G בעלת קצה חד. בזהירות להכניס את המחט לתוך ערוץ אחד עד נעצר על ידי מלט השיניים. דיכאו לאט את המזרק תוך כדי הסרת המחט מהערוץ כדי למלא את הערוץ בצבע (ראו איור 3E). נגב כל צבע מהמחט, ולאחר מכן להמשיך לערוץ הבא. מלא את כל הערוצים בצבע.הערה: ייתכן שיהיה צורך במעברים נוספים לערוצים מכיוון שהצבע קובע בערוצים במשך הדקות הראשונות. טובלים אפליקטור עם קצה כותנה בדלל הצבע, ואז מנקים את בסיס הג’יג של כל צבע על פני השטח. כמה אפליקטורים עם קצה כותנה עשויים להיות נחוצים לכך.הערה: אפליקטורים עם קצה כותנה שאינם טבולים בדלל צבע עשויים להיות שימושיים גם לניקוי הג’יג. הכנס את מחברstage הראש בכיוון הנכון על-ידי יישור הפינים לערוצים. ודאו שמחבר הבמה יושב זקוף ושויק לתג ככל האפשר (ראו איור 3F). אפשר לג’יג לרפא 24 שעות. אבטחו את מחבר הבמה לג’יג באמצעות מלט דנטלי שנרפא UV על ידי החלת מלט דנטלי לאורך הקצה שבו מחבר headstage פוגש את הג’יג. תרופת UV באמצעות אור UV עבור 20 s. 4. אריזת חבילת סיבים הערה: זה לוקח בערך 30 דקות כדי לבצע שלב זה. השלם שלב זה עבור האלקטרודות המשמשות בדגמים של בעלי חיים עם שכבה עבה של פיא מאטר. לחזק את חבילת הסיבים כדי למזער כיפוף. בהליכי עכבר, ייתכן שצעד זה לא יהיה נחוץ. להביא את החבילה של סיבים יחד בפיר אחד באמצעות מתח מים. השתמש pipette העברה כדי להפעיל טיפת מים מקצה המשפך לקצה החבילה בעוד האלקטרודה מאובטחת זקופה במזרווה. התחל עם החלת שכבה של מלט שיניים על 1.5 מ”מ עובי סביב החבילה בקצה משפך. לרפא את המלט הדנטלי עם 20 s של אור UV.הערה: להקלטות קליפת המוח, אין צורך באריזה נוספת. עבור אזורי מוח עמוקים יותר, אבטחו צינור מדריך סביב החבילה. בניית צינור מדריך והכנסת החבילה לתוך צינור המדריך למדוד ולחתוך את האורך הרצוי של צינורות פולימיד. ודא כי אורך צינורות פולימיד משאיר 2 מ”מ של סיבי פחמן טיפים חינם. למדוד ולחתוך חתיכה של צינורות מתכת 30 G 2 מ”מ קצר יותר צינורות פולימיד. השתמש בכלי סיבובי כדי להסיר קצוות חדים על צינורות המתכת. הכנס את צינורות פולימיד בתוך צינורות המתכת. מקם את האלקטרודה במאזף עם חבילת סיבי הפחמן מצביעה למעלה. אבטחו את הצינורות המורכבים למיקרו-מניפולטור, ובאמצעות מיקרוסקופ, הורידו אותו בזהירות מעל חבילת הסיבים. אבטחו את הצינורות לבסיס המלט הדנטלי הקיים באמצעות שכבה נוספת של מלט דנטלי. לרפא את המלט הדנטלי עם 20 s של אור UV.הערה: ניתן להשהות את תהליך הבנייה כאן. 5. הכנת קצה אלקטרודה הערה: זה לוקח בערך 30 דקות לכל מערך כדי לבצע שלב זה. חותכים אלקטרודות לאורך הרצוי. כהכנה לחיתוך קצה האלקטרודה, מחסנית תווים דביקים לבניית פלטפורמה בגובה של כ-1.5 מ”מ. למדוד, מקצה הפלטפורמה, את אורך האלקטרודה הרצוי ולסמן מרחק זה. הפלטפורמה תפעל כמדריך לחיתוך. מנמיכים את האלקטרודה לתוך של מים מתוכלים או מזוקקים עד שקצה המשפך שקוע לחלוטין, טיפ ראשון, ומחזיק נורמלי על פני השטח. להביא את סיבי הפחמן בודדים יחד על ידי הסרת האלקטרודה מהמים. מתח פני השטח יאחד את החבילה. אפשר לאלקטרודה להתייבש באוויר במשך 30 דקות. חבר את להב האזמל מספר 10 לידית. להקפיא את האזמל ואת האלקטרודה על ידי הצבתם במקפיא -18 °C לפחות 5 דקות. הנח את האלקטרודה כך שהסיבים ישכבו על פני המדריך (מוכן בשלב 5.1.1). חותכים את הסיבים לאורך הרצוי עם האזמל, באמצעות תנועה מתגלגלת. השלם שלב זה במהירות כדי להבטיח שהאלקטרודה והאזמל עדיין קפואים (ראו איור 3G). הזרק זרם חיובי כדי להפחית את העכבה של טיפים אלקטרודה. חבר את האלקטרודה לבוחן עכום multielectrode באמצעות המתאם המתאים (ראה טבלת חומרים). קצה אלקטרודה נמוך ~ 2 מ”מ לתוך צינור microcentrifuge של 0.1 M תמיסת מלח חוצצת פוספט (PBS). הכנס חוט הארקת לתוך צינור microcentrifuge. הזרק זרם עם המשרעת ומשך הנבחרים.הערה: שלב זה נועד להפחית את ערכי העכבה בקצה CFEA. במחקר זה, הפרמטרים הבאים הוזנו לתוך ממשק המשתמש הגרפי של תוכנת electroplating: זרם: 0.100 μA; משך: 10 שניות; הפסקה: 1 s. ניתן לחזור על תהליך זה לפי הצורך, לפי ערוץ, עד שעישולים אלקטרודה יעמדו בערכים הרצויים (ראו איור 4C). לאחר ערכי העכבה הם לפי הרצון, לשטוף את הסיבים במים deionized או מזוקק לנקות. אלקטרופלסטיקט בתמיסת ציפוי הזהב.הערה: שלב זה צריך להיעשות זמן קצר לפני ההשתלה (באותו יום).זהירות: חלק מהכימיקלים המשמשים להכנת טיפים CFEA הם מאכלים, כולל פתרון ציפוי זהב. יש להיוועץ ב-SDS לפני השימוש ולקבוע את אמצעי הזהירות המתאימים שיש לנקוט על מנת לטפל בפתרון בבטחה.הערה: כדי לספק נוקשות לחבילת הסיבים, המשתמש עשוי ליצור פתרון ציפוי זהב על ידי תחילה solubilizing PEG8000 במים deionized או מזוקק ב 1 מ”ג / מ”ל. לאחר מכן, לשלב 625 μL solubilized PEG8000 ו 375 μL פתרון ציפוי זהב ופתרון מערבולת עבור 10 s לערבב. PEG8000 יתמוסס לאחר החדרת סיבים במוח. מנמיכים את קצה צרור האלקטרודה ~ 2 מ”מ לתוך צינור microcentrifuge של תערובת ה ציפוי. הכנס את חוט ההארקה לתוך צינור microcentrifuge. הגדר פרמטרים מתאימים עבור electroplating. במחקר זה, הפרמטרים הבאים הוזנו לתוך ממשק המשתמש הגרפי של תוכנת electroplating: זרם: -0.05 μA; משך: 30 שניות; הפסקה: 5 שניות. יש לשטוף את הסיבים ביסודיות במים מסולסלים או מזוקקים. בשלב זה, למדוד את ערכי העכבה שוב אם תרצה. 6. החדרה למוח: ניתוח הישרדות, עכבר (שרירים)וניתוחים שאינם הישרדות, חמוס(מוסטילה פוטוריוס furo) הערה: הליכים כירורגיים צריכים לפעול לפי הפרוטוקול הסטנדרטי בהתאם ל- IACUC. למידע מפורט ראו Ma et al.22 לפרוטוקול ניתוח הישרדות ופופוביץ’ ואח’23 לפרוטוקול ניתוח שאינו הישרדות. בצע את ההליכים הכירורגיים aseptic לפי הנחיות ASC לניתוח הישרדות במינים מכרסמים. אלה כוללים autoclaving כל הכלים והחומרים כירורגיים ב 135 °C (5 °F) במשך 15 דקות וטיפול במנגנון סטריאוטקסי ואזור כירורגי עם 70% אתנול. יש להשתמש בכפפות כירורגיות סטריליות, שמלה חד פעמית ומסכת פנים במהלך ההליך. ניתוח הישרדות, עכבר (שרירים). מרדים את העכברים עם 2.5% איזופלוראן בתיבת אינדוקציה במשך ~ 1 דקות, עד קצב הנשימה מגיע 55-65 נשימות / דקה. לאחר מכן, לנהל 2.0% איזופלורן דרך חרוט האף כדי לשמור על הרדמה. יש למרוח משחת וטרינר על שתי העיניים כדי למנוע נזק לקרנית. בצע צביטת בוהן כדי לאמת את מידת ההרדמה הנכונה. לאחר האימות, בצע את ניתוח ההישרדות המפורטים מא ואח’22. לעקוב אחר קצב הנשימה ולשמור אותו ב 60 נשימות / דקה. שמור על טמפרטורת הגוף ב 37 °C (50 °F) באמצעות כרית חימום מבוקר תרמוסטטית. ראה שלבים 6.3-6.5 (מפורט להלן) לקבלת הוראות להכנת הגולגולת עבור גולגולת, durotomy, השתלת אלקטרודה. לאחר הניתוח, להחזיר את העכברים לכלוב התאוששות, מצויד כרית חימום 37 °C,000,000 מבודד מבעלי חיים אחרים. לכסות את הפצעים הכירורגיים במשחה האנטיביוטית. לעקוב אחר בעלי החיים עד שהם חוזרים להכרה מספקת כדי לשמור על recumbency החזה ולאפשר להם להתאושש לתקופה של 2-5 ימים. לשכן אותם בנפרד ולנטר ברציפות סימנים של זיהום או אי נוחות. תן לבעלי החיים מנה אחת של buprenorphine 72 h שחרור מתמשך (0.5-1.0 מ”ג/ק”ג) ביום הניתוח כמשעך כפיים. ניתוח ללא הישרדות, חמוס(מסטלה פוטוריוס furo) למרדים את החמוס בתחילה עם קטמין (20 מ”ג/ק”ג, i.m.), ולאחר מכן לאוורר עם 1.0%-2.0% איזופלוראן בתערובת 2:1 של תחמוצת חנקן וחמצן באמצעות מסכה. בצע צביטת בוהן כדי לאמת את מידת ההרדמה הנכונה. לאחר האימות, בצע הליכי ניתוח שאינם הישרדות המפורטים בפופוביץ ‘ואח’23. בצע קנה נשימה ולאוורר את בעלי החיים עם 1.0%-2.0% של איזופלוראן בתערובת 2:1 של תחמוצת חנקן וחמצן. יש למרוח משחה וטרינרית על שתי העיניים כדי למנוע נזק לקרנית. שמור על טמפרטורת הגוף ב 37 °C (50 °F) באמצעות כרית חימום מבוקר תרמוסטטית. ניטור קצב הלב, רמות CO2 של גאות ושפל וקצב נשימה. שמור על שיעור הנשימה בטווח הפיזיולוגי המתאים (3.5%-4.0%). ראה שלבים 6.3-6.5 (מפורט להלן) לקבלת הוראות להכנת הגולגולת עבור גולגולת, durotomy, השתלת אלקטרודה. לעקוב באופן רציף אחר האק”ג של החיה כדי להבטיח הרדמה נאותה ולהגדיל את אחוז האיזופלוראן אם האק”ג מצביע על מצוקה כלשהי. בסיום הניסוי, לנהל 1 מ”ל של פתרון נתרן פנטוברביטל ו פניטואין נתרן חמוס ולפקח עד קצב הלב וסוף הגאות והשפל CO2 מודד 0. הכנת הגולגולת באמצעות מקדחה בקוחן 0.8 מ”מ, יש לקדוח גולגולת אחת של 4 מ”מ x 4 מ”מ במיקום הרצוי להשתלה. לעכבר, לקדוח חור בר נוסף באתר contralateral עבור החדרת בורג הקרקע נירוסטה.הערה: אין לבצע durotomy עד האלקטרודה מוכנה להשתלות. להקים קרקע / התייחסות. בניסויים חריפים בחמוס, השתמש במחט 18 גרם כדי לחדור דרך העור ואת שכבת השריר המקיף את הגולגולת בצד הראש של החיה מול הגולגולת. הכנס את קצה החוט של אלקטרודה ייחוס Ag / Cl לתוך קצה המחט, ולאחר מכן לסגת את המחט מן השריר / העור, כך הכדור יושב כעת בבטחה בין השריר לגולגולת. בעכבר, לעטוף את חוט הקרקע הכסף סביב בורג הארקת נירוסטה. מאובטח עם מלט שיניים נרפא UV. חבר את האלקטרודה למחזיק האלקטרודה באמצעות רצועה דקה של סרט תיוג ואבטח את מחזיק האלקטרודה לתוך המיקרו-מניפולטור. חבר את חוט הקרקע למקור הארקת באמצעות קליפ תנין. חבר את חוט הייחוס לאלקטרודה הייחוס המוטמעת בשריר החיה. חדירת דורוטומיה ופיא הסר את הדורה מן הגולגולת באמצעות דורה לבחור. צור חור קטן בפיא. כדי לעשות זאת, להכניס ולמשוך microelectrode מתכת (מומלץ בחמוס). לחלופין, להוריד את האורתוגונל CFEA אל פני השטח של המוח כדי למנוע כל כלי כלי. ברגע שמיקום זה נקבע, הרימו את האלקטרודה וחתכו בעדינות את פני השטח של המוח במיקום זה עם איסוף דורה, מושכים כלפי מעלה עם הבחירה (מומלץ בעכבר). השתלת אלקטרודה הורידו את קצה האלקטרודה לאותו מיקום, ובמצב עדין, מתחילים להניע את האלקטרודה למוח בקצב של ~ 2 מיקרומטר / s. השתמש במיקרוסקופ כדי להבטיח שהאלקטרודה נכנסת בצורה חלקה ולא מתכופפת.הערה: אם האלקטרודה אינה נכנסת בצורה חלקה, הרימו אותה מהמוח והתיישרו מחדש את הזווית. אם הוא ממשיך להתכופף מבלי להיכנס בצורה חלקה, התאם את המיקום וחזר על תהליך חתך פני השטח של המוח למיקום הכניסה החדש. בצע את ההשתלה הכרונית והחריפה באמצעות השלבים הבאים. להשתלות כרונית: מלט את האלקטרודה במקום באמצעות מלט דנטלי נרפא UV. סגור את החתך באמצעות תפרים כירורגיים 5-0 ולבנות את כיסוי הראש. כדי לבנות כיסוי ראש להוסיף מלט דנטלי נוסף סביב אתר השתל. ודא לכסות את האף של הג’יג. משוך את העור למעלה וסביב כיסוי הראש. תפרו את החתך מאחורי כיסוי הראש עם תפרים כירורגיים 5-0. יש למרוח קרם לידוקאין ומשחה אנטיביוטית. להפסיק את ההרדמה ופעל לפי הליכי התאוששות סטנדרטיים. להשתלת חריפה: לאחר הורדת האלקטרודה והגעה לעומק הרצוי, המתינו לפחות 30 דקות לפני תחילת ההקלטה האלקטרופיזיולוגית כדי לאפשר לאלקטרודה להתיישב במקום.