Summary
Este modelo de conflicto se utiliza para medir el deterioro del control inhibitorio después de exposición a drogas adictivas, u otros factores que influyen en control inhibitorio. Un estímulo sexual y un obstáculo aversivo se presentan simultáneamente, así las ratas macho tienen que vencer el obstáculo para acercarse a la recompensa sexual.
Abstract
El presente Protocolo describe una tarea novedosa del conflicto como un modelo de control inhibitorio en ratas. En este modelo, un estímulo gratificante natural (estímulos sexuales) que representa un premio de alto valor y los estímulos aversivos (pins), se presentan al mismo tiempo. Las ratas macho tienen que trepar o saltar sobre el obstáculo lleno de pins a acercarse e investigar a la pareja sexual. Si el animal persiste en su comportamiento que se acerca, independientemente de los estímulos aversivos, se considera como un comportamiento de búsqueda de recompensa inadaptación o de riesgo. La tarea del conflicto permite la evaluación de los déficit en control inhibitorio resultante de exposición a la droga de uso indebido, como la morfina, o un acontecimiento estresante.
La principal ventaja de este modelo es que proporciona una forma sencilla y rápida para descubrir el déficit de control inhibitorio después de la exposición a las drogas opiadas u otros acontecimientos estresantes. Además de los opiáceos, este modelo de comportamiento también sería útil para descubrir rápidamente el déficit de control inhibitorio inducido por otras drogas adictivas. Sin embargo, la limitación es que el rendimiento de las ratas macho puede ser sujeto a ejercer efectos con prueba repetida en esta tarea de conflicto. En el futuro, cabe esperar que los individuos con el fenotipo compulsivo de comportamiento de búsqueda de recompensa después de la exposición a opiáceos se identificarán basado en modificar este modelo de conflicto.
Introduction
La drogadicción es una enfermedad cerebral crónica que se caracteriza por impulsivo y compulsivo de drogas buscando y teniendo1. Estas características clave de la adicción han ambos presumidas para resultar de la capacidad de control inhibitorio2,3, es decir, fracasando en la inhibición de la inmediata búsqueda de estímulos de recompensa y así desarrollar inadaptación patrones de comportamiento4.
La tarea go/no-go y señal de parada son las tareas prototipo utilizadas para medir la capacidad de respuesta inhibición2,5. Estos dos paradigmas experimentales evaluación la capacidad de reprimir acciones que son inapropiadas, de contrastar respuestas infrecuentes inhibitorias contra una implícita ir base6,7. La inhibición de respuesta en estas tareas se ha demostrado para ser deteriorado en usuarios de cocaína8,9, opiómanos10y nicotina usuarios11. Otro dos tareas — revocación aprendizaje y tareas de tiempo de reacción serial de opción múltiples, también proporcionar medidas de inhibición de respuesta, inhibitorios de control12,13. Sin embargo, la mayoría de estos paradigmas en roedores no sólo requiere entrenamiento a largo plazo para que los sujetos pueden distinguir entre los requisitos de respuesta representados por diversas señales, pero también las diferencias individuales en la velocidad del aprendizaje y aprendizaje efectos puede interferir con los resultados de la prueba inhibitoria posterior11.
En este trabajo presentamos una tarea de conflicto nuevo que puede utilizarse para medir el deterioro del control inhibitorio después de exposición a drogas adictivas. En esta tarea, un estímulo gratificante natural (estímulos sexuales) que representa un alto valor recompensa14y los estímulos aversivos (pines) que las ratas macho tienen que conquistar, se presentan al mismo tiempo. Las ratas macho tienen que trepar o saltar sobre el obstáculo lleno de pins a acercarse e investigar a la pareja sexual. Si el animal persiste en su comportamiento que se acerca, independientemente de los estímulos aversivos, se considera como un comportamiento de búsqueda de recompensa inadaptación o de riesgo. Uno de los fundamentos para el establecimiento de esta tarea es que es conceptualmente sencillo y no pone demanda en procesos ejecutivos, como hacen otras tareas. En comparación con otras tareas que miden inhibición de respuesta, esta tarea de conflicto se basa en el comportamiento natural y las ratas con función sexual normal y experiencia sexual puede ser probado directamente sin un proceso de aprendizaje. Otra razón es que un conflicto que se presentan en esta tarea entre acercarse a la recompensa y evitar los estímulos aversivos (o el riesgo de ser pinchado) puede tener una mejor validez, como imita a lo que ocurre en adictos que a menudo se colocan en el similar conflicto pero persistentemente persiguen la recompensa de la droga sin importar el riesgo de consecuencias negativas en la vida real15.
Por lo tanto, la aplicación de este modelo de conflicto es una forma rápida y sensible para descubrir el déficit de control inhibitorio después de exposición a drogas adictivas, u otros factores que pueden influir en la capacidad de control inhibitorio, como estrés. También proporciona una nueva estrategia conductual para la investigación de los mecanismos neuronales subyacentes a déficit en control inhibitorio. Además, se pueden agregar modificaciones alternativos en esta tarea. Por ejemplo, alterar la relación costo/beneficio al reemplazar el estímulo sexual con el estímulo social puede revelar significados conductuales más.
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Protocol
Este estudio es aprobado por la Junta Internacional de revisión (IRB) del Instituto de Psicología de la Academia China de Ciencias, y todos los experimentos se llevan a cabo con arreglo a la guía de institutos nacionales de salud (U.S.A) para el cuidado y uso de animales de laboratorio) 2011).
1. materiales e instalación para el modelo de conflicto
- Casa cuatro ratas por jaula (50 cm largo x 22.5 cm ancho x 30 cm de alto) en Colonia con temperatura controlada (22 – 25 ° C) y un ciclo de luz/oscuridad invertida 12 h/12 h (se enciende en 21:00) durante al menos 10 días.
Nota: Ratas Sprague-Dawley machos y hembras 330 – 400 y 230 – 250 g de peso al principio de los experimentos, se utilizaron respectivamente. - Realizar todas las pruebas bajo iluminación tenue durante la fase oscura.
- Utilice los cartones opacos (37 cm largo x 26 cm ancho x 18 cm de alto) con pino lecho de afeitar de madera para el transporte de las ratas de jaulas hogar a prueba de habitaciones.
- Manejar las ratas 3 minutos por día durante 5 días antes de comenzar los experimentos.
- Preparar 120 mL de morfina para el experimento entero. Disolver el clorhidrato de morfina en 0.9% NaCl (suero fisiológico) a una concentración final de 20 mg/mL. Almacenar a temperatura ambiente (RT).
- Preparar 10 mL de la solución de pentobarbital sódico para la cirugía. Disolver el sodio pentobarbital en 0.9% NaCl a una concentración de 1 g/mL. Almacenar a 4 ° C.
- Preparar 10 mL de benzoato de estradiol (EB) y 10 mL de progesterona para la inducción artificial del estro. Disolver el benzoato de estradiol y progesterona en aceite de sésamo en una concentración de 0,125 mg/mL y 5 mg/mL, respectivamente.
Nota: Incubar la suspensión aceite de EB o de progesterona en un baño de agua (55 – 60 ° C) durante al menos 1 h y luego agite bien. Asegúrese de que EB o progesterona se disuelve completamente. Tienda a TA. - Para las arriesgadas que buscan recompensa comportamiento pruebas, utilizar las cámaras de campo abierto recompensa-proximidad de vidrio acrílico negro. En un extremo de la arena de campo abierto (85 cm largo x 35 cm ancho x 50 cm de alto) montar una jaula de malla de alambre estímulo (15 cm de largo x 25 cm ancho x 25 cm de alto). Instale la junta con los pernos en el suelo unos 20 cm delante de la jaula del estímulo.
Nota: Pernos están fijos en los 34,5 cm largo x ancho tableros de 13 cm (figura 1). Los tableros con tres tipos de pernos utilizan alternadamente durante la prueba (tabla 2).
2. inducción estro en las hembras y apareamiento de detección en hombres
-
Ovariectomía bilateral en ratas hembra
Nota: Los instrumentos quirúrgicos y otros artículos usados en cirugía son estériles. Y la cirugía se realiza mediante una técnica aséptica.- Preparar los instrumentos quirúrgicos y materiales tales como bisturís, láminas quirúrgicas, pinzas hemostáticas, pinzas, tijeras oftálmicas, gasas, torundas de algodón, agujas de sutura y suturas de seda por adelantado, así como 75% de alcohol, yodo, sodio pentobarbital, 0.9% NaCl, sodio penicilina.
- Inyectar por vía intraperitoneal pentobarbital sódico (55 mg/kg), esperando la anestesia completa de ratas hembras. Las ratas respira suavemente y no reaccionan para pellizcar la cola.
Nota: La ovariectomía se realiza sólo cuando el peso de la rata hembra alcanza por lo menos 240 g. - Colocar la rata hembra en posición prona, afeitado de la piel en la parte posterior y desinfectar la piel expuesta con yodoforo. Utilizar un bisturí para hacer una incisión vertical media (unos 2 cm de largo) en la parte posterior (1 cm por debajo del borde de la caja torácica).
- Tire de la piel en el lado izquierdo, y blunt disecar tejido subcutáneo con pinzas hemostáticas para exponer los músculos lumbares. Cortar la capa del músculo (incisión de 1 cm) en la cavidad abdominal, hasta que se alcanza el tejido adiposo.
- Extraer el tejido adiposo con las pinzas dobladas y ubicar el ovario que es un tejido de carne-rosado (sobre 0,5 cm x 0,4 x 0,3 cm) rodeado por tejido adiposo con la trompa de Falopio trenzaba en la superficie.
- Sujete el tubo de Falopio con pinzas y ligarlo, luego cortar el ovario junto con el tejido adiposo circundante.
- Devolver la trompa residual y tejido adiposo en la cavidad abdominal después de no asegurarse de sangrado y la capa muscular de la sutura.
- Quitar el ovario en el otro lado por el mismo procedimiento y luego sutura la incisión de la piel.
- Colocar la rata en una manta climatizada hasta despertar y volver a ponerlo en la jaula de la casa.
- Después de al menos dos semanas de recuperación, utilice las ratas femeninas como una herramienta para detección y pruebas de comportamiento de apareamiento.
Nota: Prestar atención al estado de la rata hembra después de la cirugía y suministrar alimentos y agua. Mantener a las ratas ovariectomizadas solo alojadas durante una semana y luego la casa cuatro por jaula.
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Inducción del estro en ratas ovariectomizadas
- Manejar ratas hembras ovariectomizadas todo tres veces (3 minutos/día) antes de usar para la detección de acoplamiento.
- Suavemente levante una rata de la caja de transporte con la mano izquierda y sujetar en los brazos durante unos segundos. Luego vuelva a colocar la rata en la caja y repita estas operaciones durante 3 minutos.
- Inyectar por vía subcutánea el benzoato de estradiol (25 μg/rata) sobre 48 – 52 h antes del apareamiento el examen o la prueba de conflicto.
- Inyectar por vía subcutánea (1 mg/rata) la progesterona unos 4 – 6 h antes del apareamiento el examen o la prueba de conflicto.
Nota: Las hormonas estrogénicas se inyectan por vía subcutánea en la parte posterior del cuello. Desde un ciclo de estro dura ~4\u20125 días, las ratas hembra se utilizan una vez por semana.
- Manejar ratas hembras ovariectomizadas todo tres veces (3 minutos/día) antes de usar para la detección de acoplamiento.
-
Ratas macho para el apareamiento rendimiento de detección
Nota: Proyección se lleva a cabo bajo luz tenue durante la fase oscura del ciclo luz/oscuridad en la habitación de la vivienda.- Coloque una rata macho individualmente en la caja (60 cm largo x 50 cm ancho x 40 cm de alto) con pino lecho de afeitar de madera y dejarlo habituarse durante 5 minutos.
- Introducir una rata hembra celo en los comportamientos copulador masculinos caja y monitor (por observadores experimentados).
- Poner a las ratas a jaulas hogar después de ratas macho completan su primera eyaculación dentro de 30 minutos o no mostrarán intromisiones dentro de 15 min o eyaculación dentro de 30 minutos.
- Asignar las ratas macho que pasan el examen (eyaculación exitosa durante tres días consecutivos) al azar en diferentes grupos (como los grupos tratados con solución salina y morfina).
3. tratamiento previo de ratas macho antes de la prueba de conflicto
-
Tratamiento concentrado como morfina
Nota: Las ratas macho son inyectadas por vía intraperitoneal con solución salina o morfina se entrega en un atracón como régimen14 (tabla 1).- Peso de las ratas macho y calcular el volumen de inyección para cada rata basado en el peso corporal (ver tabla 1).
- Preparar las jeringuillas con las soluciones de morfina o solución salina.
- Inyectar por vía intraperitoneal una rata en un momento e inmediatamente colóquelo suavemente en la jaula casera (4 ratas/jaula).
- Después de al menos 6 h, dar a las ratas macho la segunda inyección de la misma manera.
-
Estrés agudo
Nota: Golpes de pie se entregan antes de cada prueba de conflicto en cuatro cámaras idénticas montado con cuatro generadores de choque y controlado por software profesional instalado en una computadora.- En el día de la prueba de conflicto, tomar las ratas macho a otra habitación diferente de conflicto prueba de sala.
- Poner las ratas macho en los compartimientos (30,5 cm largo x 25,4 cm de ancho x 30,5 cm de alto) para habituar durante 1 minuto.
- Establecer con antelación el programa de software. El programa incluye los choques intermitentes pie entregados dentro de 10 minutos (0.5 mA x 0.5 min s x 10; medio choque entre intervalo 40 s, rango de 10-70 s).
- Entrar animales ID y elegir activar los generadores de choque según la agrupación (el grupo de choque y el grupo de control). Luego presione el botón start .
- Una vez finalizado el procedimiento de estrés, llevar las ratas inmediatamente a la sala de prueba de conflicto en cajas de transporte; una rata por la caja.
4. la prueba de conflicto
Nota: La prueba se lleva a cabo bajo luz tenue durante la fase oscura del ciclo luz/oscuridad en la habitación de la prueba de conflicto.
- El día antes de la prueba, llevar todas las ratas a la sala de prueba de conflicto y que puedan habituarse a la cámara de campo abierto recompensa-proximidad (sin ningún obstáculo, figura 1) durante 15 minutos.
- En el día de la prueba, colocar la rata macho en la cámara que permite la exploración libre durante 10 minutos (bajo la misma condición que el día antes de la prueba).
- Colocar una rata hembra celo en la jaula del estímulo como un incentivo y permitir que al macho sujeta a libre enfoque e investigar la rata incentivos durante 5 minutos.
Nota: La rata macho se expone al azar a una hembra en celo, y esta mujer no es una rata familiar. - Después de 5 min gratis enfoque, pasar al tema macho de la jaula del estímulo hasta el otro extremo de la arena, colocar un obstáculo (un 14 tablero de cm de ancho grueso con alfileres) y entonces iniciar el primer ensayo de la prueba.
Nota: El nivel de dificultad de los obstáculos es muy variado entre los ensayos basados en los tipos de pernos y la altura de la Junta. El sistema de clasificación se muestra en la tabla 2. - Mover la rata macho de la jaula del estímulo 15-20 s después de que cada vez que supera el obstáculo.
- Final un juicio si el sujeto masculino sube o salta sobre el obstáculo 3 veces en 4 minutos e inmediatamente comenzar el próximo ensayo con el aumento de la dificultad del obstáculo.
- Si un sujeto masculino supera el obstáculo a menos de tres veces dentro de 4 minutos, terminar la prueba y registrar los tiempos supera el obstáculo.
- Traer la rata macho a la jaula casera y limpiar la cámara de campo abierto con 0.05% de ácido acético glacial.
- Puntuación cada superar o acercarse a según la tabla 2. Usar la suma de las puntuaciones para todos los surmountings como una puntuación total para un tema masculino en esta prueba de conflicto.
5. estadístico análisis
- Presentar los datos como la media ± SEM o puntos individuales de datos. En caso de que se cuestiona esa homogeneidad de varianza o distribución normal de los conjuntos de datos, registro de transformación de los conjuntos de datos.
- Analizar los efectos del tratamiento previo de la morfina en el comportamiento de búsqueda de recompensa en el día 7 y 17 de retiro (Wd7 y Wd17) utilizando pruebas t con el "tratamiento previo" como un factor entre sujetos (morfina versus solución salina, figura 2).
- Analizar los efectos del tratamiento previo de la morfina en el comportamiento de búsqueda de recompensa después de repetidas pruebas de uso análisis de varianza de medida repetidos (ANOVA) con el "tiempo del retiro" (Wd7 versus Wd14) factor en temas como "tratamiento previo" (morfina versus solución salina) como un factor entre sujetos.
- Además, utilizar la correlación de Pearson para analizar la correlación entre las puntuaciones sujetos masculinos adquirió a los 7 y 14 días de abstinencia (Wd7 y Wd14, figura 3).
Nota: Después de la conversión logarítmica de los datos originales, se realizan análisis estadísticos. - Analizar el efecto del estrés agudo sobre el comportamiento de búsqueda de recompensa en ratas droga con anterioridad mediante t-test con el estrés como un factor entre sujetos (choque versus control, figura 4)
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Representative Results
Para explorar si este modelo de conflicto puede revelar comportamientos de búsqueda de recompensa desadaptativas/riesgo inducido por opiáceos, los comportamientos de búsqueda de recompensa mostrados por los grupos pretratados de solución salina y morfina se compararon mediante pruebas t después de a corto plazo (Wd7) y a largo plazo (Wd17) retiro de la morfina respectivamente (figura 2). Los resultados muestran que en los día 7 y 17 de retirada, las ratas pretratadas de morfina mostraron significativamente más conductas que se acercan que las ratas pretratadas de solución salina (Figura 2a: t =-3.958; d.f. = 24; p < 0.01. Figura 2b: t =-2.350; d.f. = 17; p < 0,05), lo que sugiere que las ratas retirado morfina Mostrar más perseverative comportamientos ante el obstáculo aversivo y este comportamiento maladaptive persiste durante mucho tiempo después del retiro.
Cuando las ratas fueron probadas varias veces en la tarea de conflicto (figura 3), el medida repetidas ANOVA mostró un efecto principal significativo de tratamiento previo (F (1,24) = 12.910; p < 0.01). Ni efecto significativo del tiempo de retiro (comparando Wd7 y Wd14, [F (1,24) = 0.807; p > 0.05]) ni interacción significativa (retiro x interacción pretratamiento: F (1,24) = 1.093, p > 0.05) se encontró (ver figura 3a). Para investigar la estabilidad de los comportamientos arriesgados que buscan la recompensa, se analizó la correlación de las puntuaciones entre los períodos de retiro diferentes (entre Wd7 y Wd14). Los resultados mostraron que las conductas que se acercan durante los períodos de abstinencia a corto y largo plazo se correlacionaron significativamente (correlación de Pearson: r = 0.445; p < 0.05, ver figura 3b), indicando que los comportamientos de búsqueda de recompensa riesgo las ratas eran más o menos estables en pruebas repetidas.
Para investigar la influencia de eventos estresantes en la capacidad de control inhibitorio en los animales, las ratas droga con anterioridad fueron expuestas a una tensión de choque de pie intermitente antes de la prueba de conflicto. Aunque no hubo ninguna diferencia significativa entre el estrés y el grupo control (figura 4a: t =-1.207; d.f. = 17; p > 0.05), las conductas de búsqueda de la recompensa muestran una distribución bimodal dentro del grupo de estrés, sugiriendo los efectos marcadamente diferenciales del estrés agudo sobre comportamientos de riesgo de la búsqueda de la recompensa entre los individuos (ver Figura 4b).
Figura 1: el aparato para la prueba de conflicto La cámara de campo abierto (85 cm largo x 35 cm ancho x 50 cm de alto) con una jaula de estímulo manteniendo una rata hembra estral fue utilizado para probar los comportamientos que buscan recompensa bajo conflicto. Los temas masculinos tuvieron que superar un obstáculo peligroso, es decir, subir sobre un tablero continuamente aumentado (34,5 cm largo x 13 cm de ancho) con pernos, para acercarse a la jaula del estímulo. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 2: los comportamientos riesgosos que buscan recompensa en las pruebas de conflicto de las ratas masculinas. (una) las puntuaciones para abordar conductas aparecen por la morfina (negro) y solución salina (blanco) tratados los grupos en el día 7 de retiro. (b) las puntuaciones para abordar conductas aparecen por la morfina (negro) y solución salina (blanco) tratados los grupos el día 17 de retiro. Las barras representan la media ± SEM. * indica p < 0.05; ** indica p < 0.01; Sal = solución salina, Mor = Morphine.This figura ha sido modificada desde17 con permiso. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 3: los comportamientos arriesgados que buscan recompensa probaron consecutivamente en día 7 y 14 de la abstinencia de la morfina de. (una) las puntuaciones para abordar conductas aparecen por la morfina (negro) y solución salina (blanco) tratados los grupos en día 7 y 14 de la abstinencia (Wd7 y Wd14). Las barras representan la media ± SEM. (b) la correlación de las puntuaciones en conductas de riesgo que buscan recompensa entre dos pruebas el día 7 y 14 de la abstinencia. * indica p < 0.05; ** indica p < 0.01. Sal = solución salina, Mor = morfina. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 4: efecto de la tensión de choque del pie sobre comportamientos de búsqueda de recompensa en el test de conflicto (una) las puntuaciones para abordar conductas mostradas por el control (gris) y choque a (negro) grupos sometidos a pretratamiento salino. Las barras representan la media ± SEM. * indica p < 0.05; ** indica p < 0.01. (b) las cuentas para abordar conductas mostradas por los grupos de control y choque aparecen en puntos únicos. Estas cifras se han modificado de la referencia17 con permiso. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
| Día 1 | Día 2 | Día 3 | Día 4 | Día 5 | |
| 1 inyección dest | 10 mg/kg | 20 mg/kg | 40 mg/kg | 40 mg/kg | 40 mg/kg |
| 2 inyección dend (6 h más tarde) | 20 mg/kg | 40 mg/kg | 40 mg/kg | 40 mg/kg | 40 mg/kg |
Tabla 1: esquema de tratamiento compulsivo-como morfina. Las ratas macho son pretratadas dos veces diariamente por 5 días con inyecciones intraperitoneales de solución salina o de morfina en un atracón como régimen17: 10, 20, 20, 40, 40, 40, 40, 40, 40 y 40 mg/kg. Las dos dosis de morfina administrada cada día son por lo menos 6 horas aparte.
| Ensayo | Obstáculo | Puntuación por enfoque |
| 1 | un + 0 cm | 0.5 |
| 2 | un + 2 cm | 1.0 |
| 3 | un + 4 cm | 1.5 |
| 4 | b + 4 cm | 3.0 |
| 5 | b + 7 cm | 3.5 |
| 6 | b + 10 cm | 4.0 |
| 7 | b + 13 cm | 4.5 |
| 8 | b + 17 cm | 5.0 |
| 9 | c + 17 cm | 6.0 |
| 10 | c + 21 cm | 6.5 |
| 11 | c + 25 cm | 7.0 |
| 12 | c + 29 cm | 7.5 |
Tabla 2: clasificación por dificultad para el sujeto conquistado por enfoque. Según la longitud de pernos y de media distancia entre los polos, se utilizaron tres tipos de Junta gruesa con clavijas: una con pin-longitud de 0.5 cm, distancia media de 1 cm; b con pin-longitud de 0,8 cm, distancia media de 0,5 cm; y c con pasador de longitud de 2 cm, la distancia media de 1 cm. La Junta repetidamente se intensificó como sigue: 0, 2, 4, 7, 10, 13, 17, 21, 25 y 29 cm. Por lo tanto, hay 12 niveles de dificultad de superar el obstáculo, es decir, 12 ensayos, durante la prueba. La cantidad de dificultad el tema conquistó cada vez que enfoque la jaula del estímulo se anotó y suman a la puntuación total para cada tema17.
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Discussion
El déficit de control inhibitorio causado por drogas abuso18 juega un papel clave en la promoción de compulsivo de la droga que buscan/toma comportamientos y19,20de recaída. El modelo de conflicto presentado aquí ofrece un nuevo enfoque para explorar los cambios en el control inhibitorio de los individuos expuestos a drogas adictivas.
Hay varios pasos críticos en el protocolo. En primer lugar, los sujetos (ratas macho) deben adquirir experiencia sexual antes de entrar en la tarea de seguimiento del conflicto. Por ejemplo, las ratas macho necesitan pasar la proyección para la cópula (copulando al menos tres veces) antes de tratamiento farmacológico y se asignan aleatoriamente en diferentes grupos. Para llevar a cabo la cópula sin problemas de detección, dos puntos deben ser atención pagadas para. Uno es el peso corporal de ratas hembra tras la ovariectomía. La ovariectomía se realiza sólo cuando el peso de las ratas hembra alcanza por lo menos 240 g. Puesto que la maduración del cuerpo de ratas hembras ocurre después de la maduración gonadal21, ovariectomía temprana podría impedir a ratas macho copulando con éxito con ratas hembra a pesar de que las hembras fueron administradas hormonas estrogénicas. El otro punto es que las ratas macho deben habituarse a las cajas de cribado antes de la cópula con ratas hembras, para evitar la influencia de neofobia a un contexto novedoso en cópula siguiente.
Factores de estrés deben controlarse estrechamente durante todo el experimento. Machos y hembras se manejan y se acostumbra al transporte antes de que comience la tarea de conflicto. Por otra parte, durante la habituación a la cámara de recompensa-proximidad antes del día de la prueba, ratas macho son repetidamente captadas y moverse desde la parte delantera de la jaula de estímulo al otro extremo de la cámara varias veces.
A medida que continúa la tarea de conflicto, el obstáculo (el tablero con alfileres) es varias veces mayor, así no pueden ver o sentir directamente la rata hembra en la jaula de estímulo más ratas macho tras el obstáculo. Para evitar que las ratas macho atraídas continuamente por la pareja sexual, algún material de la ropa de cama sucia por ratas hembras estros se colocan en la jaula del estímulo, permitiendo que el olor femenino que difunden en el aire. La ropa de cama es recogido por delante la tarea de conflicto y almacenado a-20 ° C hasta su uso.
Después de la cesación del tratamiento de la morfina, las ratas macho podrían han sufrido síntomas físicos del retiro que desaparecer 3 días más tarde14. Aunque había una posibilidad de que sus patas se pinchó por pernos, no se detectó ninguna lesión grave o sostenible y las actividades de los varones no fueron influenciadas.
En esta tarea de conflicto, también uno puede investigar el impacto del valor de la recompensa en busca de recompensa comportamientos, por ejemplo, cambiar el valor de la recompensa mediante la sustitución de la rata hembra (recompensa sexual) con un hombre rata (recompensa social)14,16. Si recompensas tanto sexuales como sociales son utilizados en un experimento, lo mejor sería realizar el experimento en dos cámaras de proximidad de recompensa, una recompensa sexual y una recompensa social. Si el experimento tiene que ser llevado a cabo en una sola cámara, la cámara y la jaula de estímulo deben ser limpiadas cuidadosamente con 0.1% de ácido acético glacial entre asignaturas, así como pruebas, para evitar la contaminación olfativa entre estímulos masculinos y femeninos . Los pernos a bordo deben renovarse regularmente para asegurar su constante amenaza a las ratas macho.
Desempeño de las ratas macho puede ser sujeto a ejercer efecto con prueba repetida en esta tarea de conflicto. Nos dimos cuenta de que algunos animales (sobre todo las ratas pretratadas de solución salina) podrían evitar las patillas mejores a través del ejercicio de saltar sobre el obstáculo durante la segunda prueba (figura 3a). Aunque hay una correlación significativa entre los comportamientos arriesgados que buscan recompensa durante las dos pruebas repetidas, no ha sido verificado si esta tarea se puede utilizar para la identificación de los fenotipos de alto y bajo riesgo de comportamiento de búsqueda de recompensa. Por lo tanto, hasta ahora esta tarea de conflicto se adapta a la sonda rápidamente cualquier cambio en el control inhibitorio después de tratamientos farmacológicos o de comportamiento.
En comparación con la tarea go/no-go, tarea de señal de parada, múltiples tareas de tiempo de reacción serial opciones y revocación de aprendizaje, que reflejan la capacidad del sujeto de la inhibición de respuestas inadecuadas después de aprender las reglas de tareas2,5 , en esta tarea de conflicto, los temas no es necesario inhibir las respuestas aprendidas pero inhibir su deseo/motivación espontánea debido a la posible consecuencia negativa. Por lo tanto esta tarea conflicto imita mejor la situación de conflicto que los adictos a menudo enfrentan y ayuda a examinar la capacidad de control inhibitorio durante el proceso psicológico de sopesar el costo y beneficio. Por otra parte, en contraste con otras tareas de toma de decisiones, como decisión arriesgada haciendo22,23 o juego tarea24,25, esta tarea de conflicto es más simple y más fácil de realizar, puesto que sólo consiste en solo recompensa y el único riesgo.
El modelo de conflicto hemos establecido puede utilizarse para revelar déficit en control inhibitorio después de la exposición a la droga opiáceosa – morfina. Creemos que este modelo de comportamiento también sería útil para descubrir rápidamente la debilitación del control inhibitorio inducido por otras drogas adictivas. Además, se identificarán el confiable nacrótico-inducida compulsivo búsqueda de recompensa conductual fenotipo basado en este modelo de conflicto. En la actualidad, estamos trabajando para reemplazar el obstáculo (el tablero completo de pernos) con una red eléctrica para que golpes de pie pueden ser entregados a las ratas macho y también a modificar el procedimiento conductual para medir repetidamente comportamientos de búsqueda de la recompensa del animal en la cara de la consecuencia negativa (pie amortiguadores). Como es sabido, existe un modelo de comportamiento disponible del nacrótico-inducida que buscan recompensa comportamiento compulsivo hasta el momento, que es probablemente debido al efecto analgésico de los opiáceos26,27.
Clínicamente, el estrés es uno de los factores importantes que llevan a la recaída después de la retirada de drogas28. Además, el estrés también es un importante factor que influyen en comportamiento de inhibición/impulsividad/compulsividad29. La introducción de este modelo de conflicto también nos permite observar las influencias de varios acontecimientos estresantes en la capacidad de control inhibitorio en temas rápidamente después de la exposición a las drogas de abuso.
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Disclosures
Los autores no tienen nada que revelar.
Acknowledgments
Este trabajo fue apoyado por CAS laboratorio clave de Salud Mental, Instituto de Psicología (KLMH2016K01) y evaluación e investigación de tecnología de intervención para la población de pacientes de estrés postraumático (JCYJ20170413170301569)
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acetic acid | Beijing Tongguangjingxi Chemical company | CN No.81601 | CH3COOH |
| Benzypenicillin sodium for Injection | Huabei Pharmaceutical | F7072109 | C16H17N2NaO4S |
| Cotton swabs | Wan Xin, Shandong, China | 8 cm | |
| β-estradiol benzoate | SIGMA-ALDRICH | E8515-200MG | estradiol benzoate |
| Gauze | Wan Xin, Shandong, China | 21s × 21s 110×100 | |
| Hemostatic forceps | Beijing Zhong Sheng Wanda Biotechnology Co.,Ltd. | ||
| Morphine hydrochloride | Qinghai Pharmaceutical Co. Ltd | 20100105 | Morphine hydrochloride |
| Ophthalmic scissors | Beijing Zhong Sheng Wanda Biotechnology Co.,Ltd. | ||
| Pentobarbital Sodium | Sigma | C11H17O3N2Na | |
| Precision animal shocker | Coulbourn | ||
| Progesterone | SIGMA-ALDRICH | V900699-5G | progesterone |
| Sesama oil | Fengyi trading company ltd. | Sesama oil | |
| Sodium chloride injection | HuaLu Pharmaceutical | H17092107 | NaCl |
| Scalpels | Gillette | 96797241 | |
| Surgical blades | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co.,Ltd | ||
| Suture needles | Han Qin, Shanghai, China | Δ1/2 6×14 | |
| Silk sutures | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co.,Ltd | ||
| Sprague-Dawley rats | Vital River Animal Center, Beijing, China | Sprague-Dawley | animal strain |
| Syringe | WeiGao Group Medical Polymer Co.Ltd | 1 mL, 2 mL | |
| Tweezers | Beijing Zhong Sheng Wanda Biotechnology Co.,Ltd. |
References
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