Summary

Rilevamento comportamentale e formazione immagine di Neuromast della caverna messicano

Published: April 06, 2019
doi:

Summary

Qui, presentiamo i metodi per lo studio di alto-rendimento di una serie della caverna messicano comportamenti e colorazione vitale di un sistema che mechanosensory. Questi metodi utilizzano script software libero e su misura, che forniscono un metodo pratico ed economico per gli studi dei comportamenti.

Abstract

Caverna-dimora animali hanno evoluto una serie di tratti morfologici e comportamentali per adattarsi ai loro ambienti perennemente buio e cibo di tipo sparse. Tra questi tratti, comportamento di foraggiamento è una delle finestre utili in vantaggi funzionali dell’evoluzione caratteristica comportamentale. Sono presentati qui metodi aggiornati per analizzare il comportamento di attrazione di vibrazione (VAB: un comportamento di foraggiamento adattivo) e formazione immagine di mechanosensors associato della grotta-adattato tetra, Astyanax mexicanus. Inoltre, i metodi sono presentati per l’inseguimento ad alta velocità di una serie di comportamenti di caverna aggiuntive tra cui iperattività e perdita di sonno. Caverna Mostra anche maggiore ansia, comportamento ripetitivo e socievolezza. Di conseguenza, caverna serve come modello animale per comportamenti evoluti. Questi metodi utilizzano gli script di software libero e su misura che possono essere applicati ad altri tipi di comportamento. Questi metodi forniscono alternative pratiche ed economicamente vantaggiose per il software di monitoraggio disponibili in commercio.

Introduction

Il tetra messicano, Astyanax mexicanus (Teleostei: Characidae), è l’unico fra i pesci per avere due radicalmente alternativo morfismo – un morph avvistato, Superficie-abitazione e un morph cieco, caverne, composto da diversi distinti popolazioni1. Sebbene diversi per morfologia e fisiologia, essi sono ancora interfertile2,3. Questi morphs interfertile sembrano sono evolute rapidamente (~ 20.000 anni)4, che li rende un sistema modello ideale per lo studio di rapido adattamento. Caverna è noti per avere una suite di divergenti tratti morfologici e comportamentali, tra cui una maggiore densità delle papille gustative, aumento del numero di mechanosensors, sintonizzato su una frequenza particolare di uno stimolo di vibrazione, iperattività, comportamento di foraggiamento e insonnia. Molti di questi comportamenti probabilmente evoluti contemporaneamente, alcuni dei quali sono stati suggeriti per essere vantaggioso nell’oscurità delle grotte per foraggiare5 e modalità di risparmio energetico in ambienti scuri e alimenti-sparse6,7.

In molti sistemi di modello evolutivo, è difficile da acquisire conoscenze integrate sul cambiamento di morfologia e comportamento come animale in risposta all’ambiente, perché la maggior parte delle specie sono distribuita su una pendenza continua in ambienti complessi. Tuttavia, il netto contrasto tra la grotta e la superficie morph Astianatte che si sono evoluti in altamente contrastanti ambienti delineati da un ecotono tagliente ha portato ad Astianatte emergendo come un eccellente modello per capire l’evoluzione degli animali. Questo rende possibile collegare più facilmente geni e processi di sviluppo con tratti adattivi e selezione nell’ambiente. Inoltre, recenti indagini biomediche di questi tratti in Astyanax ha dimostrato che questi tratti possono parallelo sintomi umano8,9,10. Ad esempio, perdita di sonno e di socialità e aumento di iperattività, comportamento ripetitivo e livello di cortisolo sono simili a ciò che è osservato in esseri umani con autismo spettro disturbo8.

Per affrontare la complessa co-evoluzione di molti comportamenti e caratteristiche morfologiche, è vantaggioso per molti di loro per evidenziare sottostanti vie genetiche e molecolari di analisi. Metodi per caratterizzare il grado di fenotipi comportamentali grotta-tipo di superficie, cave e ibrido morph di Astianattesono presentati qui. I comportamenti focali analizzati per caratterizzare il fenotipo sono Grotta-adattato foraggiamento comportamento (comportamento vibrazionale attrazione, d’ora in poi indicato come VAB) e iperattività/sonno durata11,12. Anche presentato è un metodo di imaging per il sistema sensoriale associato VAB13. Recentemente, molti software di monitoraggio open source per l’esecuzione di analisi comportamentale sono diventati disponibili14,15. Questi funzionano molto bene per brevi video, a meno di 10 minuti lunghi. Tuttavia, diventa problematico se il video è più lungo a causa di intenso monitoraggio/calcolo tempo. Software disponibile in commercio in grado può essere costoso. I metodi presentati principalmente usano freeware e quindi sono considerati metodi di alto-rendimento e costi contenuti. Inoltre incluso sono risultati rappresentativi basati su questi metodi.

Protocol

Tutte le procedure sono eseguite seguendo le istruzioni riportate in “Principi di laboratorio Animal Care” (National Institute of Health pubblicazione n. 85-23, rivisto 1985) e approvato da Università delle Hawaii a Manoa istituzionale Animal Care e uso Protocollo animale Comitato 17-2560-3. 1. test di vibrazione attrazione comportamento (VAB) (≤ 10 min per intera registrazione procedura) Nota: Utilizzare una termocamera ad infrarossi sensibile o costruire una term…

Representative Results

I risultati presentati qui sono esempi rappresentativi di ciò che può essere acquisito con i metodi presentati. Di conseguenza, risultati possono deviare leggermente da quelli presentati qui per superficie pesce a seconda delle condizioni sperimentali e caverna. Comportamento di attrazione di vibrazione Risultati rappresentativi per VAB possono esser…

Discussion

Questi metodi presentati sono di facile accesso, ma possono essere complicati da eseguire a causa della natura delle sue origini di freeware. Pertanto, si consiglia di eseguire analisi di prova e analisi prima di qualsiasi sperimentazione reale.

Il tasso di generazione di dati può essere rapido, una volta stabiliti il quadro sperimentale e analitico. Una volta stabilita, è possibile registrare due pesci in 7 min per il dosaggio di VAB, 30 pesci in 24 ore per il dosaggio di attività/sonno e …

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Ringraziamo tutti i membri del laboratorio Yoshizawa tra cui Cetraro N., N. Simon, Valdez C., C. Macapac, J. Choi, L. Lu, J. Nguyen, S. Podhorzer, H. Hernandes, J. Fong, J. Kato e I. Signore per la cura del pesce sul pesce sperimentale utilizzato in questo manoscritto. Ringraziamo anche i membri del laboratorio r. Keene tra cui P. Masek per addestrare MY da montare telecamera CCD IR. Infine, vorremmo ringraziare il Media Lab – facoltà di scienze sociali – scuola di comunicazione presso l’Università delle Hawaii Manoa per il loro prezioso aiuto con rendendo il video, soprattutto B. Smith, J. Lam e S. bianco. Questo lavoro è stato supportato dalla Fondazione di comunità hawaiana (16CON-78919 e 18CON-90818) e Istituto nazionale di salute NIGMS (P20GM125508) concede a MY.

Materials

4-Di-1-ASP (4-(4-(dimethylaminostyryl)-1-methylpyridinium iodide) MilliporeSigma D3418
880 nm wave length black light Advanced Illumination BL41192-880
avfs freeware Version 1.0.0.6 http://turtlewar.org/avfs/
Avisynth freeware Version 2.6.0 http://avisynth.nl/index.php/Main_Page
Cygwin freeware Version 2.11.0 https://www.cygwin.com/
Cylindrical assay chamber (Pyrex 325 ml glass dish) Corning 3140-100 10 cm diameter 5 cm high
Ethovision XT Noldus Information  Technology, Wageningen, The Netherlands Version 14 https://www.noldus.com/animal-behavior-research/products/ethovision-xt
Fish Aquarium Cylinder Soft Sponge Stone Water Filter, Black Jardin (through Amazon.com) NA Sponge filter for Sleep/hyperactivity recording system
Grade A Brine shrimp eggs Brine shrimp direct BSEA16Z
ImageJ freeware Version 1.52e https://imagej.nih.gov/ij/
macro 1.8/12.5-75mm C-mount zoom lens Toyo NA Attach to USB webcam by using c-mount, which is printed in 3-D printer
Neutral Regulator Seachem NA
Optical cast plastic IR long-pass filter Edmund optics 43-948 Cut into a small piece to fit in the CCD of USB webcam
pfmap freeware Build 178 http://pismotec.com/download/ (at “Download Archive” link at the bottom)
Reef Crystals Reef Salt Instant Ocean RC15-10
SwisTrack freeware Version 4 https://en.wikibooks.org/wiki/SwisTrack
USB webcam (LifeCam Studio 1080p HD Webcam) Microsoft Q2F-00013 Cut 2-2.5 cm of the front
WinAutomation freeware Version 8 https://www.winautomation.com/ (free stand-alone app for this procedure)
Windows operating system Microsoft 7, 8 or 10 https://www.microsoft.com/en-us/windows
x264vfw freeware NA https://sourceforge.net/projects/x264vfw/

Riferimenti

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Citazione di questo articolo
Worsham, M., Fernandes, V. F. L., Settle, A., Balaan, C., Lactaoen, K., Tuttle, L. J., Iwashita, M., Yoshizawa, M. Behavioral Tracking and Neuromast Imaging of Mexican Cavefish. J. Vis. Exp. (146), e59099, doi:10.3791/59099 (2019).

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