Summary

스테이 시스 고주파 초음파에 의해 모니터링 하는 쥐에 의해 유도 된 깊은 정 맥 혈전 증

Published: April 13, 2018
doi:

Summary

현재 프로토콜 스테이 시스 모델을 사용 하 여 정 맥 혈전 증을 얻기에 단계를 설명 합니다. 또한, 우리는 시간이 지남에 혈전 형성 및 해상도 측정 하는 비-침략 적 방법을 사용 하는.

Abstract

정 맥 혈전 증 1에서 500의 연례 부각 인구의 1-2%에 영향을 미치는 일반적인 상태 이다. 정 맥 혈전 증 폐 색 전 증 또는 결과 만성적인 다리 통증, 붓기, 및 궤, 특징 후 thrombotic 증후군 또는 만성 폐 고혈압 인 중요 한 만성 통해 죽음으로 이어질 수 있습니다 호흡기 타협. 가장 일반적인 심혈 관 질환 심근 경색 및 허 혈 성 뇌졸중 후 이며 암, 조직의 질환, 수술 등 주요 외상 다른 장애의 과정을 복잡 하 게 수로 모든 의료 분야에 대 한 임상 도전 이다.

실험 모델은 이러한 메커니즘을 연구 하는 데 필요한. 스테이 시스 모델 일관성 혈전 크기와 혈전의 정량 금액을 유도합니다. 그러나, 그것은 체계적으로 열 등 한 베 나 정 맥 혈전 크기에서 변화 및 모든 잘못 된 데이터 해석에의 측 지점 선 하는 데 필요한. 초음파를 사용 하 여 혈전 크기를 측정 하는 비-침략 적 기술을 개발 했습니다. 이 기술을 사용 하 여, 우리가 평가할 수 혈전 개발 및 해상도 같은 동물에서 시간이 지남에. 이 방법은 마우스 교체, 감소, 및 연구에 있는 동물의 구체화의 원리와 일치 하는 정 맥 혈전 증의 정량화에 필요한 수를 제한 합니다. 우리는 초음파로 혈전 무게와 측정으로 혈전 크기 상관의 조직학 분석 얻은 증명 하고있다. 따라서, 현재 연구에 높은 주파수의 초음파를 사용 하 여 모니터링 하는 방법 열 등 한 베 나 정 맥 stasis 모델을 사용 하 여 마우스에 깊은 정 맥 혈전 증을 유발 하는 방법을 설명 합니다.

Introduction

정 맥 혈전 색 전 증 (VTE), 깊은 정 맥 혈전 증 (DVT) 폐 색 전 증의 구성 된 심근 경색 및 뇌졸중 후 심장 혈관 죽음의 세 번째 주요 원인입니다. 그것은 1에서 5001의 연간 발생률을 인구의 1-2%에 영향을 미치는 일반적인 조건. VTE 이어질 수 있습니다: 1) 폐 색 전 증; 통해 죽음 만성적인 다리 통증, 붓기, 및 궤; 특징 2) 후 thrombotic 증후군 또는 3) 중요 한 만성 호흡 타협의 결과로 만성 폐 고혈압. VTE는 다중 요인 질병 이며 그것은 전에 백 년 이상 설명으로 혈액의 흐름, 혈관 벽, 또는 hypercoagulable 국가 응고 fibrinolytic 시스템 사이의 균형의 붕괴 때문에 손상의 스테이 시스에서 발생할 수 있습니다. Virchow에 의해 Virchow의 3 인조로 알려져 있다.

대부분의 경우에서 그것은 인간의 DVT 샘플을 얻을 수, 때문에 연구원은 DVT의 실험 동물 모델을 개발 했습니다. 쥐2, 마우스3, 토끼4, 돼지5,6개 및 비 인간 영장류7 을 포함 하 여 여러 동물 사용 되었습니다. 쥐 유전자 변형 될 수 있으며 DVT를 공부 하는 가장 자주 사용된 동물. 모든 동물에서의 자발적인 DVT 하지 쥐에서 관찰 됩니다. 따라서, 정 맥 벽의 물리적 또는 화학적 변경 마우스에서 혈전 증을 만드는 데 사용 됩니다. 우리는 열 등 한 베 나 정 맥 (IVC) 마우스8,,910의 혈전 증을 유발 하 이전 제 2 철 염화 모델을 이용 했다. 이 분 이내 폐색 혈전을 안정적으로 생산의 장점이 고 급성 DVT 동안 항 응고 제와 항 혈소판 약물의 역할을 조사 하는 데 사용할 수 있습니다. 그러나, 그것은 터미널 절차입니다. 따라서, 공부 하 고 급성과 만성 DVT, 스테이 시스 모델 더 적당 하다. 이 모델에서는 혈전 형성 IVC, DVT 개발 Virchow의 3 인조의 요소 중 하나에서 혈액 흐름의 완전 한 중단에 의해 유도 된다. DVT 형성 FeCl3 모델11에 비해 이점이 해상도 공부 하 고이 모델을 사용할 수 있습니다.

혈전 형성 및 해상도 마이크로 이미징-고주파 초음파 시스템12을 사용 하 여 시간이 지남에 따라 비-침략 적 방법을 개발 했습니다. 우리는 이전 측정 초음파에 의해 정 맥 혈전 증의 혈전 병 적 얻은 호의 상관을 증명 하고있다. 우리가 측정 초음파 상관 혈전 무게와 혈전 영역 histochemistry9,10정량으로 얻은 두 후속 연구에서 확인 했습니다. 더 중요 한 것은, 우리는 높은 주파수 초음파 쥐12에서 깊은 정 맥 혈전의 형성을 모니터링 하는 데 사용할 수 있습니다 보여주 있다. 그것은 또한 비-침략 적 방법으로 혈전 해상도 척도를 사용할 수 있습니다.

여기, 우리는 스테이 시스 유도 혈전 증 마우스 모델 및 어떻게 혈전 형성을 모니터링할 수 있습니다 비 접촉 고주파 초음파를 사용 하 여 시간이 지남에 사용 하 여 혈전 형성을 허용 하는 프로토콜을 설명 합니다.

Protocol

모든 절차는 기관 동물 관리 위원회의 맥 길 대학 몬트리올, QC, 캐나다에 의해 승인 되었다. 필요한 모든 장비는 테이블에 나열 된 나. 1. murine (C57BL/6J) IVC 스테이 시스 프로토콜 수술 준비참고: 이것은 생존 수술 하 고 따라서, 적절 한 무 균 기술을 항상 따라 해야. 이 포함 모든 물질이 가까이 다는 것을 확인, 청소 전과 사용 사이 악기를 살 균 하 고 모?…

Representative Results

스테이 시스 정 맥 혈전 증 모델 스테이 시스 모델에서 쥐 취는, 그리고 절 개 폭 열 등 한 베 나 정 맥 (IVC)로 이루어집니다. 절 개 초음파 프로브와 함께 방해 하지 것 이라고 하는 방식으로 중간 개복 술 대신 마우스의 왼쪽 또는 오른쪽에 이루어집니다. 복 부 근육과 피부는 배 다시 IVC (그림 1</stron…

Discussion

스테이 시스 모델을 사용 하 여 성공적인 정 맥 혈전 형성에 대 한 몇 가지 중요 한 단계가 있습니다. 유도 정 맥 혈전 증의 열 등 한 베 나 정 맥과 대동맥 주변 지방의 축적으로 인해 오래 된 쥐에 있는 더 많은 도전 이다. 이상적으로,이 절차를 진행 하는 쥐 8-10 주 오래 된 해야 합니다. 신중 하지 무딘 해 부 및 합자는 IVC 내 피 손상을 유도를 취해야 한다. 또한, 수술 후 적어도 30 분 동안 34 ° C 배?…

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 작품은 심장과 스트로크 캐나다 재단에서 교부 금에 의해 그리고에 모리스와 벨라 Fainman 가족 기초에 의해 지원 되었다. 저자에 대 한 그녀의 기술 VEVO770 초음파 이미징 시스템 베로 미를 감사 하 고 싶습니다.

Materials

6-0 perma-hand silk suture Ethicon 706G
Surgical Scissors Fine Science Tools 20830-00
Suture tying forceps Fine Science Tools 20830-00
blunt forceps (straight and curved) Fine Science Tools 20830-00
Needle Driver Fine Science Tools 13002-10
Moria Spring Scissors Fine Science Tools 15396-00
1ml syringes BD Biosciences
26G needles Becton Dickinson & Co.
VEVO 770 High Resolution Imaging System Visualsonics No longer sold
SR Buprenorphine ZooPharm Given to LDI by Vet
Surgery Microscope Leica Leica M651
Systan eye oinment Alcon 288/28062-0
2×2 sterile Gauze CDMV #104148
Cotton Tip Applicators from JGH
Transpore hypoallergenic surgical tape CDMV #7411
Ultrasound gel (Aquasonic-100) Dufort & Lavigne #AKEN4061
Incubator From JGH
Isoflurane Dispomed
Anesthetic chamber,hoses, and adminstration equipment Dispomed
Hair remover Nair
Water heated hard pad Braintree Scientific, Inc. #HHP-2
Gaymar heater water pump TP500 MATVET Inc. #R-500305
Infra-red heating lamp electrimat inc. #1R175R-PAR
Mouse rectal temperature prope emkaTECHNOLOGIES
Sterile water From JGH

Riferimenti

  1. Fowkes, F. J., Price, J. F., Fowkes, F. G. Incidence of diagnosed deep vein thrombosis in the general population: systematic review. Eur J Vasc Endovasc Surg. 25 (1), 1-5 (2003).
  2. McGuinness, C. L., et al. Recruitment of labelled monocytes by experimental venous thrombi. Thromb Haemost. 85 (6), 1018-1024 (2001).
  3. Singh, I., et al. Failure of thrombus to resolve in urokinase-type plasminogen activator gene-knockout mice: rescue by normal bone marrow-derived cells. Circulation. 107 (6), 869-875 (2003).
  4. Itoh, K., Ieko, M., Hiraguchi, E., Kitayama, H., Tsukamoto, E. In vivo kinetics of 99mTc labeled recombinant tissue plasminogen activator in rabbits. Ann Nucl Med. 8 (3), 193-199 (1994).
  5. Kang, C., Bonneau, M., Brouland, J. P., Bal dit Sollier, C., Drouet, L. In vivo pig models of venous thrombosis mimicking human disease. Thromb Haemost. 89 (2), 256-263 (2003).
  6. Knight, L. C., Baidoo, K. E., Romano, J. E., Gabriel, J. L., Maurer, A. H. Imaging pulmonary emboli and deep venous thrombi with 99mTc-bitistatin, a platelet-binding polypeptide from viper venom. J Nucl Med. 41 (6), 1056-1064 (2000).
  7. Wakefield, T. W., et al. Venous thrombosis prophylaxis by inflammatory inhibition without anticoagulation therapy. J Vasc Surg. 31 (2), 309-324 (2000).
  8. Robins, R. S., et al. Vascular Gas6 contributes to thrombogenesis and promotes tissue factor up-regulation after vessel injury in mice. Blood. 121 (4), 692-699 (2013).
  9. Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Bertin, F. R., Blostein, M. D. Prostaglandin E synthase is upregulated by Gas6 during cancer-induced venous thrombosis. Blood. 127 (6), 769-777 (2016).
  10. Laurance, S., et al. Gas6 (Growth Arrest-Specific 6) Promotes Inflammatory (CCR2hiCX3CR1lo) Monocyte Recruitment in Venous Thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. , (2017).
  11. Diaz, J. A., et al. Critical review of mouse models of venous thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).
  12. Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Blostein, M. D. In vivo monitoring of venous thrombosis in mice. J Thromb Haemost. 10 (3), 447-452 (2012).
  13. Brandt, M., et al. Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches. Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).
  14. Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model. J Thromb Haemost. 13 (4), 660-664 (2015).
  15. Luther, N., et al. Innate Effector-Memory T Cell Activation Regulates Post-Thrombotic Vein Wall Inflammation and Thrombus Resolution. Circ Res. , (2016).
  16. Subramaniam, S., et al. Distinct contributions of complement factors to platelet activation and fibrin formation in venous thrombus development. Blood. 129 (16), 2291-2302 (2017).
  17. Diaz, J. A., et al. Thrombogenesis with continuous blood flow in the inferior vena cava. A novel mouse model. Thromb Haemost. 104 (2), 366-375 (2010).

Play Video

Citazione di questo articolo
Rys, R. N., Blostein, M. D., Lemarié, C. A. Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography. J. Vis. Exp. (134), e57392, doi:10.3791/57392 (2018).

View Video