القياس الكمي لبروتين اميلويد السلائف γ-سيكريتاسي-بوساطة والانقسام الشق في لوسيفراس يستند إلى الخلية مراسل منصات المقايسة

ويعتقد أن السبب الرئيسي في نيوروديجينيريشن في أدمغة المرضى الذين يعانون من مرض الزهايمر (AD)¹oligomeric أشكال اميلويد-بيتا (Aβ). الببتيدات Aβ تنتجها الانقسام التدرجي لبروتين اميلويد السلائف (APP)، أولاً ب β-سيكريتاسي ثم γ-سيكريتاسي². في العقد الماضي، ركزت النهج العلاجي تجاه معاملة الإعلان على منع Aβ الإنتاج³. معظم الدراسات ركزت على أما زيادة النشاط α-سيكريتاسي، الذي يمكن أن يحول دون الانقسام γ-سيكريتاسي للتطبيق ومما خفض إنتاج Aβ، أو تثبيط الأنشطة γ-سيكريتاسي β-و/أو⁴. ولسوء الحظ، تثبيط غير انتقائية نتائج سيكريتاسيس β أو γ في الآثار الجانبية التي لا يمكن تجنبها التي سبب التدخل مع أداء الأخرى ركائز الفسيولوجية سيكريتاسي β و γ^5،6. وأفادت الدراسات الأخيرة فيما يتعلق بمثبطات γ-سيكريتاسي، اكتشاف عدد من المغيرون الكيميائية والجينية التي يمكن أن تنظم إنتاج Aβ أثناء ممارسة آثار لا تذكر على تجهيز أساسي γ-سيكريتاسي-بوساطة من الدرجة^{7 ،،}من^{89،10،11،12}، إلا أن العلاجات الناجحة لم توضع بعد. وهكذا، كذلك مبررة شاشات منهجية لاكتشاف رواية المعدلات الوراثية والكيميائية التي قد تعدل بشكل انتقائي γ-سيكريتاسي-بوساطة تجهيز التطبيق.

من المعروف أن تهزم أكثر من 90 من البروتينات المختلفة ترتكز على غشاء γ-سيكريتاسي. بين ركائز هذه هي الدرجة، ونشاطها أمر حاسم لتحديد مصير الخلية والتمايز خلال التنمية¹³. تحوير بشكل انتقائي التطبيق γ-سيكريتاسي-حفز المعالجة في الغياب التأثير على درجة تجهيز ستكون ضرورية للتقليل إلى أدنى حد الآثار الجانبية المتعلقة بالشق من مثبطات γ-سيكريتاسي، وهذه الانتقائية ويعتقد أن عامل أساسي الذي سوف إملاء فعالية بيولوجية المغيرون γ-سيكريتاسي المحتملة للمعالجة المزمنة للإعلان. وقد كان هناك عدد من مشتقات أريلسولفوناميدي، مثل GSI-953 (بيجاسيستات)، وخدمات إدارة المباني-708163 (أفاجاسيستات)، التي وجدت لمعرض تثبيط قوية وانتقائية γ-سيكريتاسي^14،15. دراسة سابقة أظهرت أنه يمكن ملاحظة التفاضلية تثبيط الانقسام γ-سيكريتاسي التطبيق ودرجة استخدام مقايسة كمية على أساس أليسا في تركيبة مع فيفو التحقق من استخدام الزرد¹⁶. وعلاوة على ذلك، أنشئت نماذج التحليل يستند إلى الخلية لمعالجة انتقائية الركيزة المحتملة γ-سيكريتاسي نحو التطبيق والدرجة^17،18. استخدام بروتوكولات مماثلة لتلك الموصوفة هنا، لقد اكتشفنا مؤخرا فئة جديدة من (د)-ليوسيناميديس أن تعدل أظهرت الانقسام γ-سيكريتاسي للتطبيق مع الانتقائية تجنيب حز¹⁹. معا، هذه المجموعة من الدراسات يوفر دليلاً لمفهوم دعم الفكرة القائلة بأن الانتقائية الركازة/توافر γ-سيكريتاسي يمكن أن تخضع للتحوير الكيميائي والتحقق التجريبي. ومع ذلك، هذه المنابر المقايسة غالباً ما تعتمد على قراءات الإنتاجية منخفضة نسبيا والنهج ذات العمالة الكثيفة التي قد لا تفي بالمعايير الصناعية لبرامج اكتشاف المخدرات.

ونحن قد ولدت مؤخرا فحوصات الجينات مراسل لوسيفراس يستند إلى الخلية التي يمكن أن تحدد كمياً نشاط الحفاز γ-سيكريتاسي نحو اثنين من ركائز متميزة والجزء الطرفي ج حمض 99 الأمينية للتطبيق (التطبيق–C99) وفي خارج الخلية حذف المجال الشق الببتيد (NΔE). وقد استخدمت على نطاق واسع كركائز مباشرة من γ-سيكريتاسي في فحوصات مختلفة التطبيق–C99 و NΔE. لتوليد فحوصات الجينات مراسل لوسيفراس متجانسة ومتسقة للانقسام γ-سيكريتاسي للتطبيق–C99 أو NΔE، نحن إنشاء خط الخلية مستقرة المستمدة من HEK واحد (CG) مؤثرا يعبر عن Gal4 اليراع يحركها مروج لوسيفراس مراسل ( Gal4-Luc) والتطبيق–C99 Gal4/VP16-معلم الانصهار البروتين (C99-GV). وبالإضافة إلى ذلك، أنشأنا آخر خط الخلية مستقرة المستمدة من HEK (الحرس الوطني) مؤثرا يعبر عن لوك Gal4 و NΔE Gal4/VP16-معلم (NΔE-GV). باستخدام هذه الاختبارات رواية الركيزة الخاصة γ-سيكريتاسي، نقدم الآن طريقة لتقدير وتميز نشاط الحفاز γ-سيكريتاسي تجاه ركائز متميزة (التطبيق–C99 في الخلايا CG)، أو NΔE في خلايا الحرس الوطني. وعلاوة على ذلك، صممت فحوصات محددة الركازة γ-سيكريتاسي أن تفضي إلى منصات فحص محتوى عالية. هذه الاختبارات التي تم إنشاؤها حديثا γ-سيكريتاسي يمكن أن يمهد لاكتشاف المغيرون رواية γ-سيكريتاسي التي يمكن أن تحسن الوظائف المعرفية بقمع إنتاج Aβ دون التماس تثبيط الشق غير مرغوب فيه لعلاج الجيل المقبل للإعلان.