In Vitro Caractérisation des propriétés électrophysiologiques des fibres afférentes du côlon chez le rat

Le tractus gastro-intestinal (TGI) est richement innervé par les nerfs afférents extrinsèques qui transmettent des signaux sensoriels de l’intestin vers le système nerveux central et qui contribuent à l’interaction cerveau-intestin. Excitabilité altérée de ces afférences extrinsèques, ainsi qu’altération Centre de traitement des entrées afférentes, sous-tend la douleur viscérale et autres symptômes de GI conditions, y compris fonctionnels et inflammatoires de l’intestin maladies¹. L’information sensorielle de la rectum est véhiculée principalement par le biais de la thoraco-lombaire/hypogastrique et les nerfs lombo-sacrée/pelvienne (PN)². Il y a eu un intérêt accru en étudiant les propriétés électrophysiologiques des ces fibres afférentes primaires dans les modèles de maladies rongeurs. Cependant, in vivo des enregistrements électrophysiologiques des afférences du côlon chez les rongeurs est un défi technique et requiert des compétences chirurgicales considérables. En outre, les modifications hémodynamiques, le mouvement du tissu et anesthésiques peuvent également avoir des répercussions l’activité nerveuse et sensibilité pour tester des stimuli en vivo. Par conséquent, ces dernières années, un nombre croissant d’études ont employé in vitro (ex vivo) préparations de différentes espèces, y compris les souris, rats, cobayes et l’homme, pour étudier les mécanismes de transduction sensorielle en colique afférences et l’excitabilité altérée dans les états pathologiques. ^{3 , 4 , 5 , 6 , 7 , 8}

Ont principalement deux types d’ex vivo la préparation colique : la préparation de « plat-feuille »^5,9,10 et le « tube » préparation^3,4. Un protocole vidéo pour la préparation de rectum murin « plat-feuille » a été publiée précédemment¹¹. Dans le présent protocole, le rectum de souris, avec le PN) ou des nerfs splanchniques lombaires (LSN) attachés, est récolté et superfusée dans une chambre de tissu. Le rectum est découpé longitudinalement, et le faisceau de nerfs se prolonge dans un compartiment d’enregistrement rempli d’huile de paraffine. L’activité nerveuse est enregistrée à l’aide d’une électrode de platine-iridium monopolaire. Le protocole permet l’identification des champs réceptifs des fibres afférentes individuels en utilisant non biaisée de la stimulation électrique. Elle localise à la demande des stimuli chimiques, ainsi que l’application des paradigmes différents de stimulation mécanique (p. ex., focale muqueuse sonder et circonférentielle stretch), à des terminaisons nerveuses afférentes. Parce que le nerf doit être étendu à une chambre séparée de la chambre de tissu, il est essentiel de garder le nerf ci-joint relativement long ; la dissection réussie des nerfs pose un défi à ceux nouvelle à cette méthodologie. Plus récemment, Nullens et coll. publié un protocole vidéo pour l’enregistrement in vitro des afférences mésentériques murine jéjunale et segments du côlon¹². Dans cette préparation « tube », le segment de l’intestin avec le mésentère attaché est gardé intact, permettant ainsi de distension graduée et l’administration intra – et extra-luminale de différents produits chimiques. Depuis le nerf du mésentère est enregistré à l’aide d’une électrode d’aspiration, qui peut être positionnée à proximité du tissu, activité afférente peut être enregistrée, même si le nerf du mésentère est relativement court. Toutefois, le nerf du mésentère se compose de peuplements mixtes de vagales et la colonne vertébrale des fibres afférentes qui innervent le jéjunum ou thoraco-lombaire hypogastrique. Lombo-sacrée afférences pelviens innervant le rectum, qui ne peuvent pas être distinguée dans le présent protocole. Nous présentons ici un protocole détaillé pour l’enregistrement électrophysiologique des afférences colique de rat à l’aide de la préparation du rectum « tube » avec un PG intact Cette méthode peut permettre la caractérisation des propriétés fonctionnelles des lombaires splanchnique (hypogastrique) et lombo-sacrée afférences pelvienne.