开放领域的活动水平来评估机车和行为活动水平。该协议提供了一个精心设计的,标准化的协议为神经肌肉疾病的临床前试验中使用。
露地活动监控系统全面评估运动和小鼠行为活动水平。它是评估神经肌肉疾病和治疗药物可以改善运动和/或肌肉功能疗效的动物模型机车减值一个有用的工具。露地酶活性的测定提供了不同的措施,不是肌肉的力量,这通常是由握力测量评估。它也可以显示如何药物可能会影响身体其他系统,以及额外的观察指标使用时。此外,如行驶总距离的措施反映了6分钟步行试验,临床试验的测量结果。然而,开放场活动监控也与显著挑战相关联的:打开字段活性测定根据动物的应变,年龄,性别,和昼夜节律变化。此外,房间温度,湿度,照明,噪音,甚至气味会影响评估的结果。总体来说,这款米anuscript提供了一个完善的测试和标准化的开放领域活动的SOP在神经肌肉疾病的动物模型的临床前试验。我们提供了重要的考虑因素,典型的结果,数据分析和详细的优势和开放现场测试的弱点进行了讨论。此外,我们在临床前试验用开放的领域活动时,为最佳的研究设计提供建议。
动物模型已经学习关于疾病的机制是有用的,但他们在临床试验中预测疗效效用经常被1-3挑战。每年有无数的“有为”的临床前研究发表;然而,很少有建议的干预显示出积极的结果时,移动到临床试验。这些差异往往归因于出版偏见,过于乐观的结论,并设计和执行,导致不能再现的结果1-3临床前研究甚少。
在药物发展为神经肌肉障碍的当前进展,对于设计良好的临床前试验的需求日益增加。特别是,有必要进行严格的方法,可以进行规范化,双盲的方式,与验证,重现性好,可翻译结果的措施。由于先天性肌肉中的一员病协会,与要进行更严格的临床前研究的愿望,我们在这里分享我们的标准作业程序(SOP)的开放式现场活动。这之前的SOP进行了验证4,出版作为TREAT-NMD的标准作业程序为假肥大型肌营养不良症(DMD)的动物模型5的一部分。我们已经使用了这种方法,以表型和测试的许多药物的治疗效果在各种神经肌肉疾病的动物模型,包括LAMA2 DY-2J / J(Dy2J)小鼠动物模型中为先天性肌营养不良(CMD)6,7 。反过来,这篇文章改编自我们之前发表的TREAT-NMD的SOP 5。
旷场活动监视系统全面评估运动和小鼠的行为学活动的水平,这可与机车的功能相关联。该试验也被广泛用于评估焦虑等与探索行为8-10。具体而言,开放领域是屁股一个有用的工具essing在神经肌肉病11,12的动物模型机车减值和治疗药物可以改善运动和/或运动功能-6,7,13,14的功效。开放领域的活动的评估提供了不同的措施,不是肌肉的力量,这就是通常与握力测量,它显示了如何药物会影响身体其他系统(如中枢神经系统),以及5。此外,开放领域活动的措施,总行驶距离,反映了6分钟步行试验,临床试验结果的措施,其重点是亚极量运动性能和寿命15,16质量。总的来说,这使得开放式现场活动测试在临床前试验中使用有益起次要或者辅助的测量结果。然而,在旷场活动的监控系统还具有与其相关联显著挑战。该测试是行为和因为它是由众多的外部影响可能相当可变因素。举例来说,这种行为可以通过探索驱动器( 即认知),焦虑,疾病,生理节律,环境因素,遗传背景的影响,除了电机输出10。因此,它必须与一个受控的环境中进行标准化的方式这项措施。这里介绍的协议,详细描述了我们开放的领域活动的SOP。它提供了一步一步的过程和重要的考虑因素的进一步讨论,以控制环境条件,并有助于减少更详细的变化,典型的结果,数据分析和评估的优势和劣势。
旷场活动测定是一种体内测定法,可以是有益的,以评估在神经肌肉病6,7,11-14的动物模型中的疾病进展和药效。如示于图2中 ,它提供了活性水平的普遍反映机车功能的评估。这是一个不同的措施,不是肌肉的力量,使之成为一个理想的起次要或者辅助观察指标的临床前药物研究执行。此外,它是一种临床上相关的15,非侵入性的量度,其可以在整个研究期间,可以进行多次。然而,行为和机车活性也受其它因素,以及( 即实验者处理,环境条件,和认知)产生变异在旷场活动数据。本文的目标是提供一个良好的测试和标准协议,减少变异,并允许结果为compared在多个实验室,在我们的领域内提高翻译的希望。
这一措施的主要缺点是,它是高度可变的,由众多的外部因素的影响。但是,我们开发协议时,考虑到了这一点。我们评估了各种测试方案包括持续时间1-5天收集数据的。最后,我们确定之前收集数据进行文书驯化熟悉的动物用试验室环境和执行4天的数据收集的变化量显著减少的结果数据5。该协议的最初目的是评估在mdx小鼠模型的行为和机车活动水平;然而,该协议是最近确认在Dy2J动物模型,以及6。有人建议,该协议在您的实验室之前,在临床前试验用它每个动物模型中的标准化。
开放领域的活动由遗传背景17,性别18-20,18岁,和昼夜节律变化21。这需要相同的年龄,性别,和遗传背景的动物在同一时间进行评估。在规划阶段,心思缜密,应投入决定在什么年龄或年龄层开阔的活动水平进行评估。每只动物模型有其独特的疾病进展和机车和行为表型,其中变化的严重程度和由6,15年龄( 图2和图3)。因此,为了确定临床和病理相关的时间点,以评估旷场活动的措施是重要的。需要每个治疗组中,以检测统计学差异显著动物的总数由动物模型,年龄和性别而变化,以及。因此,有关样本量的计算也应该在规划阶段进行,以determ的INE需要每个治疗组中的动物的总数来检测统计上显著差异。这些计算还应该考虑到,在研究中使用的考虑额外的措施的结果( 例如 ,握力测量或组织学分析)。基于我们的功率计算,我们通常使用每个治疗组10-12动物。此外,特别要注意在何种对照菌株被用于本研究。有不正当的对照菌株在临床前研究中使用的倾向。例如,BL6小鼠经常被用来作为对照菌株对mdx小鼠;然而,mdx小鼠是在BL10背景。正如在图3中,BL10小鼠比BL6小鼠,这使得不可能进行比较MDX和BL6数据更加活跃。当进行与mdx小鼠的临床前研究,BL10小鼠应作为对照菌株。此外,如果研究正在与Dy2J小鼠中进行,BL6小鼠应该被用作对照OL压力。
小环境的变化也可以显著影响活动水平。这些包括照明,温度,湿度,气味,噪声和人类活动4,15。因此,它是非常重要的,测试中在温度和湿度受控的房间与非直接照明在每天5相同的时间执行。试验室应均匀分布到整个房间,并在直接照明或阴影或黑暗的角落5不放置。动物应该随机分配到他们的测试室的每一天,以减少整个房间变化的环境条件的影响,并且应使其适应试验室10-30分钟之前,收集数据。确保跟踪各动物的方块分配在整个研究期间,以确保箱/环境的任何影响被均等地分布在不同的治疗组中。个人装阿尼玛LS进入测试腔室和处理在整个研究期间,将动物应当不清楚治疗组及动物应变时可能的。在许多情况下,受影响的基因型是由相关的控制显着不同和致盲是不可能的。不过,个人应始终处理和未处理组之间的蒙蔽。此外,所有个人都应该离开房间数据收集过程中,以减少房间内的噪声和干扰,所有室应收集数据的每次会议后进行彻底清洗。这些动作将显著减少的变化的数据。要注意的是,动物是也非常容易适应15是很重要的。因此,可以认为,动物从测试室直接以下每天在60分钟的数据收集和旷场活动水平被除去来评价不超过每月一次以上。
移动的总距离和总动换货时间的测量往往是最敏感的开放领域活动的测量5。在Dy2J模型中,垂直活动测定往往是最敏感的旷场活动度量( 图3);然而,它可以是很难捕捉的更小的动物精确垂直活动的测量。例如,它可能是一个较小的动物会显示出饲养行为和传感器不会捕获它由于垂直传感器的高度。因此,我们建议测试动物不早于5周龄。它也可能是一种动物会睡在整个数据采集时段的持续时间。如果是这种情况,它是适当补充数据收集的额外的一天。最后,内盒的象限除法器或传感器的堵塞对准不良可能导致不准确的数据也是如此。因此,这是非常重要结束后进行传感器预检查,在测试前,并检查所有数据每个数据采集时段。
分析开放领域的活动数据的注意事项也应考虑。开放领域的活动数据有一种倾向,是不正常分布,并有异常值4。在此之前执行任何统计分析,我们的生物统计学家强烈建议检查数据的正常和异常值。如果数据不服从正态分布,应该考虑比较装置时,利用非参数检验。另外,所有数据应该由不知道什么治疗组是一个个体进行分析。
总体而言,开放领域活动的措施具有重要的优点:a)它既是运动和行为的活动,这是强烈的,但并不总是具有相关功能的机车进行全面评估; B)这是一个简单的措施来执行;三)需要在测试过程中没有动物处理; D)它是一个可以在整个STU的时间来进行一次以上非侵入性的措施DY; E)没有特殊的训练是需要进行测试; F)多动物可以在同一时间进行测试;和g),它是一种临床相关的测量结果5,16。然而,检测治疗时,请记住,其他的因素会影响动物的行为,并依次开放领域活动的测量。药物可有中枢神经系统和等宽体效应和行为也可以通过紧张的环境影响。其结果是,它可能难以区分是否改变机车或行为活动水平改变有关的肌肉功能,肌肉力量,或者是从药物副作用所致。因此,额外的功能,组织学和或分子检测应进行为好。这个标准化的协议也被成功地用于其它肌肉疾病4,17;然而,如在图3中看到的,试验性研究应进行初步评估在动物中测量的灵敏度模型。
The authors have nothing to disclose.
本出版物是通过固化CMD,法国肌肉营养不良症协会(AFM),从肌肉萎缩症协会,健康(1K26RR032082,1P50AR060836-01,1U54HD071601,2R24HD050846-06)全国学院,国防部平移研究资助(资助W81XWH,11-1-0330,W81XWH,11-1-0782,W81XWH,10-1-0659,W81XWH,11-1-0809,W81XWH-09-1-0599)和父项目肌肉营养不良症的试点补助( PPMD)。
本文是几个在一系列的SOP在先天性肌肉疾病领域经常使用的方法之一。它反映了努力,在最近的先天性肌肉疾病协会研讨会,2013年4月在华盛顿特区举行的讨论,并成立了由20名专家先天性肌肉疾病领域
Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
Equipment | |||
VersaMax Open Field Activity Monitoring system with acrylic test chambers, and X, Y, Z axis sensors | AccuScan Instruments, Inc. Columbus Ohio, USA | Retired | |
Fusion Open Field Activity Monitoring system with acrylic test chambers, and X, Y, Z axis sensors | Omnitech Electronics, Inc. Columbus Ohio, USA | Suggested system currently on the market | |
Computer | Dell, Inc. | ||
Materials | |||
Virkon-S Broad spectrum disinfectant (Potassium Peroxymonosulfate/ Sodium Chloride) | Pharmacal Research Laboratories, Inc. | ||
Mice | |||
B6.WK-Lama2dy-2J/J (Dy2J) | Jackson Lab | 000524 | |
C57BL/6J (BL6) | Jackson Lab | 000664 | |
SJL/J (SJL) | Jackson Lab | 000686 | |
C57BL/10ScSn-Dmdmdx/J (mdx) | Jackson Lab | 001801 | |
C57BL/10ScSnJ (BL10) | Jackson Lab | 000476 |