Summary

تقرير من الأحماض الدهنية المسموح وتركيزات ذيفان الكوليرا عن طريق خلايا الإنسان الظهارية في الأمعاء وBALB / ج الضامة ماوس

Published: May 30, 2013
doi:

Summary

شرعنا في تحديد التركيزات المسموح من ثلاثة أحماض الدهنية (الأحماض الأوليك، اللينوليك واللينولينيك) وبكتيريا الكوليرا التي لم تؤثر سلبا بشكل ملحوظ وبقاء الخلية بواسطة solubilizing الأحماض الدهنية والسموم واستخدامها في المقايسات بقاء الخلية.

Abstract

لقد كان دور إيجابي من الأحماض الدهنية في الوقاية والتخفيف من الأمراض غير الإنسان والإنسان والاستمرار في أن تكون موثقة على نطاق واسع. وتشمل هذه الأدوار التأثيرات على الأمراض المعدية وغير المعدية بما في ذلك الوقاية من التهاب وكذلك حصانة للأمراض المعدية. الكوليرا هو مرض معوية حادة تسببها بكتيريا ضمة الكوليرا. ويحدث ذلك في الدول النامية، وإذا تركت دون علاج، يمكن أن يؤدي إلى الموت. بينما لقاحات الكوليرا موجودة، فهي ليست دائما فعالة وهناك حاجة إلى أساليب وقائية أخرى. شرعنا في تحديد التركيزات المسموح من ثلاثة أحماض الدهنية (الأحماض الأوليك، اللينوليك واللينولينيك) وبكتيريا الكوليرا باستخدام الماوس BALB / C الضامة والخلايا الظهارية في الأمعاء البشرية، على التوالي. نحن solubilized الأحماض الدهنية أعلاه وتستخدم المقايسات تكاثر الخلايا لتحديد نطاقات تركيز وتركيزات معينة من الأحماض الدهنية التي توجدر تضر الإنسان المعوية بقاء الخلية الظهارية. نحن solubilized توكسين الكوليرا واستخدامه في فحص لتحديد نطاقات تركيز وتركيزات محددة من بكتيريا الكوليرا التي لا تقلل إحصائيا بقاء الخلية في BALB / C الضامة.

وجدنا تركيزات الأحماض الدهنية الأمثل أن تكون بين 1-5 نانوغرام / ميكرولتر، وذلك لذيفان الكوليرا أن يكون <30 نانوغرام لكل معاملة. هذه البيانات قد تساعد الدراسات المستقبلية التي تهدف إلى إيجاد دور المخاطية الواقية للالأحماض الدهنية في الوقاية أو التخفيف من الالتهابات الكوليرا.

Introduction

وكانت الفوائد الصحية للأحماض الدهنية، مثل الأوليك، اللينوليك والأحماض اللينولينيك والاستمرار في أن تكون موثقة. على سبيل المثال، يساعد حمض الأوليك تسهيل تغلغل المخدرات محبة للدهون في الجسم 1،2، ويقلل من الإصابة بأمراض القلب التاجية بنسبة 24٪ عند استبداله للأحماض الدهنية المشبعة ويستخدم لعلاج الأمراض الأيضية مثل Adrenoleukodystrophy (4) الذي هو العاشر مرتبطة اضطراب وراثي في ​​استقلاب الأحماض الدهنية. . بينما هو مقدمة ضرورية لحمض الأراكيدونيك في الثدييات، وحمض اللينوليك (على عكس حمض الأوليك) لا توليفها من قبل الهيئة، ويجب الحصول عليها من خلال مصادر خارجية مثل كتبها استهلاك بذور الكتان عرض 5 الدراسات العديد من الآثار الصحية المفيدة للحمض اللينوليك مثل: خصائص مضادة للشيخوخة للبشرة؛ 6 خصائص مضادة للالتهابات، 7 انخفاض انتشار القولون والمستقيم والبروستاتا خلايا سرطان؛ 8 والقدرة على محاربة السمنة وتعزيز سو صحة القلب والأوعية الدموية. 9 حمض اللينولينيك يلعب دورا في الحد من التهاب اللثة، الثرموبوكسان 10 وتحوير والحيوي بروستاسيكلين 11

آربيتا 12 درس تأثير الأحماض الدهنية الصفراء والكوليسترول في V. التعبير الكوليرا 'S من عوامل الفوعة والحركة. وأشار ياماساكي 13 أن استخراج الميثانول من الفلفل الأحمر الحار، والمركبات المستخرجة طبيعيا أخرى، يمكن أن يحتمل أن ينخفض ​​إنتاج سموم الكوليرا. فمن المتصور أن تنظر في استخدام المنتجات الغذائية التي هي غنية في الأحماض الدهنية أعلاه (مثل بذور الكتان) في الوقاية والتخفيف من الأمراض المعدية مثل الكوليرا من خلال توفير حصانة. أجرينا تحقيقات لذوبان الأحماض الدهنية وتحديد، وذلك باستخدام المقايسات تكاثر الخلايا، والحد الأقصى لتركيز الأحماض الدهنية أن الخلايا الظهارية في الأمعاء البشرية يمكن أن يتسامح بدون آثار ضارة على CEجدوى ليرة لبنانية. افترضنا أن الأحماض الأوليك، اللينوليك واللينولينيك توفير تأثير مفيد على بقاء الخلية بتركيزات أقل، ولكن هذا في تركيزات أعلى أنها سوف تكون سامة للخلايا. نحن أيضا solubilized السم الكوليرا وتحديد الحد الأقصى لتركيز السم الكوليرا الذي BALB / C الضامة الماوس يمكن أن يتسامح دون حدوث انخفاض كبير في بقاء الخلية. نحن نفترض تأثير السامة للبكتيريا الكوليرا على بقاء الخلية حتى على مستوى منخفض جدا. طريقة solubilizing السم الكوليرا واستخدامه لتحديد الحد الأقصى لمقدار السم أن الخلايا يمكن أن يتسامح دون حدوث انخفاض كبير في البقاء على قيد الحياة ويوفر ميزة للدراسات المستقبلية. على سبيل المثال، وهو مزيج من المنهجيات أعلاه يمكن استخدامها لتحديد ما إذا كانت الأحماض الدهنية توفر الخلايا مع حصانة ضد الالتهابات الكوليرا. إلى حد علمنا، لم يتم استكشاف هذه المنهجية العقلانية و.

نحن ديscuss كيف يمكن استخدام البيانات الأولية لدينا في التحقيقات في وقت لاحق لتحديد ما إذا الأوليك والأحماض اللينوليك واللينولينيك توفر الخلايا مع حصانة ضد الإصابة بالكوليرا.

Protocol

1. زراعة الأنسجة استخدام الضامة العضلة المصحف (الفئران BALB / ج) وفيما يتعلق بتحديد بكتيريا الكوليرا. الثقافة في البداية كل من م. خلايا العضلة بعد تعليمات البائع. نشر BALB / ج خلايا ا…

Representative Results

تحديد تركيز الأمثل من الأحماض الدهنية يتم تعريف تركيز الأمثل للأحماض الدهنية والحد الأقصى للتركيز على نمو الخلايا التي هي مماثلة لأو يفوق عدد الخلايا السيطرة، مع تقلبات منخفضة نسبيا في النتائج. لتحديد تركيز الأمثل للالأوليك، وعو…

Discussion

اقتراح من تركيز الأحماض الدهنية والسمية الكوليرا

في حين أن الآلية الدقيقة لكيفية الأحماض الدهنية تعزيز مناعة المخاطية غير معروف، وقد حاول العديد من الدراسات للتحقيق آثارها المفيدة. وتهدف دراستنا إلى تقديم منهجية لتحديد الحد الأ?…

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

نشكر بولا كوبوس والدكتور إفروس فاسيليو للمساعدة مختبر وتوفير الضامة الماوس، على التوالي. ونشكر أيضا لدينا مختبر مدير ريتشارد Criasia للتوجيه والمساعدة في المواد. وأخيرا، فإن الكتاب أشكر Ramanpreet كاور للمساعدة في إنتاج الفيديو.

Materials

Cells/Reagent
Mus musculus macrophages ATCC ATCC RAW 264.7
Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium ATCC 30-2002
L-glutamine ATCC 30-2115
Fetal bovine serum Bio-west S0250
Antibiotic/antimycotic Hyclone SV3007901
Human intestinal epithelial cells ATCC ATTC CCL-241
HybriCare media ATCC 46-X
Oleic Acid Sigma-Aldrich O1008
Linoleic Acid Sigma-Aldrich L-1376
Linolenic Acid Sigma-Aldrich L-2376
Cholera toxin Sigma-Aldrich C8052
Equipment
BD Falcon 96-Well Cell Culture Plates BD Biosciences 351172
Spectrophotometer with Dynex Revelations 4.22 software Dynex 91000101

Riferimenti

  1. Franceur, M. L., Golden, G. M., Potts, R. O. Oleic Acid: Its effects on stratum corneum in relation to (trans) dermal drug delivery. Pharm Res. 7 (6), 621-627 (1990).
  2. Tandon, P., et al. X-ray diffraction and spectroscopic studies of oleic acid-sodium acetate. Chem. Phys. Lipids. 109 (1), 37-45 (1990).
  3. Kris-Etherton, P. M. The debate about n-6 polyunsaturated fatty acid recommendations for cardiovascular health. Journal of the American Diabetic Association. 110 (2), 201-204 (2010).
  4. Rizzo, W. B., Phillips, M. W., et al. Adrenoleukodystrophy: dietary oleic acid lowers hexacosanoate levels. Annals of Neurology. 21 (3), 232-239 (1987).
  5. Bozan, B., Temelli, F. Chemical composition and oxidative stability of flax, safflower and poppy seed and seed oil. Bioresource Tech. 99, 6354-6359 (2005).
  6. Krein, S., Meldurm, H., Hawkins, S., Foy, V. Clinical benefits of conjugated linoleic acid to 3-dimensional wrinkle morphology. J. American Academy of Dermatology. 60 (3), AB30 (2009).
  7. Yu, Y., Correll, P. H., Heuvel, P. J. Conjugated linoleic acid decreases production of pro-inflammatory products in macrophages: Evidence for a PPARy dependent mechanism. Biochimica et Biophysica Acta. 1581 (3), 89-99 (2002).
  8. Palombo, J., Ganguly, A., Bistrian, B., Menard, M. The anti-proliferative effects of biologically active isomers of conjugated linoleic acid on human colorectal and prostatic cancer cells. Cancer Letters. 177, 163-172 (2002).
  9. Granda, M., Sinclair, A. J. Fatty acids and obesity. Current Pharm. Design. 15 (36), 4117-4125 (2009).
  10. Rosenstein, E., Kushner, L., Kramer, N., Kazandjian, G. Pilot study of dietary fatty acid supplementation in the treatment of adult periodontitis. Prostaglandins, Leukotrienes and Essential F.A. 68 (3), 213-218 (2003).
  11. Ferretti, A., Flanagan, V. Antithromboxane activity of dietary alpha-linolenic acid: a pilot study. Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. 54 (6), 451-455 (1995).
  12. Arpita, C., Pradeep, K. D., Chowdhury, R. Effect of Fatty Acids and Cholesterol Present in Bile on Expression of Virulence Factors and Motility of Vibrio cholera. Infection and Immunity. 75 (4), 1946-1953 (2007).
  13. Yamasaki, S., Asakura, M., Neogi, S. B., Hinenoya, A., Iwaoka, E., Aoki, S. Inhibition of virulence potential of Vibrio cholerae by natural compounds. Indian J. Med. Res. 133 (2), 232-239 (2011).
  14. Hendriksen, R. S., Price, L. B., et al. Population Genetics of Vibrio cholerae from Nepal in 2010: Evidence on the origin of the Haitian outbreak. mBio. 2 (4), 1-6 (2011).
  15. Schaeffler, A., Gross, P., et al. Fatty acid-induced induction of Toll-like receptor-4/nuclear factor-kappa B pathway in adipocytes links nutritional signaling with innate immunity. Immunology. 126 (2), 233-245 (2009).

Play Video

Citazione di questo articolo
Tamari, F., Tychowski, J., Lorentzen, L. Determination of Tolerable Fatty Acids and Cholera Toxin Concentrations Using Human Intestinal Epithelial Cells and BALB/c Mouse Macrophages. J. Vis. Exp. (75), e50491, doi:10.3791/50491 (2013).

View Video