Las mitocondrias asociadas ER membranas (MAM) y glicoesfingolípidos microdominios enriquecidos (GEMS): Aislamiento de cerebro de ratón

Orgánulos intracelulares son estructuras altamente dinámicas con diferentes forma y composición, que son sometidos a células específicas de señales intrínsecas y extrínsecas. Sus membranas son a menudo yuxtapuestos en sitios de contacto definidas, que se convierten en los cubos para el intercambio de moléculas de señalización y los componentes de membrana ^1,2,3,4. Los inter-organellar microdominios de membrana que se forman entre el retículo endoplasmático (ER) y la mitocondria en la apertura de la Ca ^IP3-2 sensible son conocidos canal ⁺ como las mitocondrias asociado-ER membranas o MAMS ^4,5,6. La composición de proteína / lípido y propiedades bioquímicas de estos sitios de membrana de contacto han sido ampliamente estudiados en particular en relación con su papel en la regulación intracelular de Ca ^{2 + 4,5,6.} El ER sirve como el almacén principal de la concentración de Ca ^{2 +,} y en esta capacidad regula una gran variedad de procesos celulares aguas abajo de Ca ^{2 +} señalización, including post-traduccional plegamiento de la proteína y proteína maturation7. Las mitocondrias, por otra parte, mantener la homeostasis del Ca ^{2 +,} por la precarga de concentración citosólica de Ca ^{2 +} evitando de este modo la iniciación de las vías de apoptosis aguas abajo de Ca ^{2 +} desequilibrio ^4,8. La naturaleza dinámica de los mames hace sitios ideales para diseccionar los mecanismos básicos celulares, incluyendo Ca ^{2 +} señalización y regulación mitocondrial de Ca ^{2 +} concentración supervivencia, la biosíntesis de lípidos y el transporte, la energía y el metabolismo celular ^{4,9,10,11,12.} Varios protocolos se han descrito para la purificación de estos microdominios de tejido hepático y células cultivadas ^13,14.

Tomando los métodos publicados anteriormente en cuenta, se ha adaptado un protocolo para el aislamiento de las mitocondrias y MAM desde el cerebro de ratón adulto. Para este procedimiento se ha agregado una etapa de purificación adicional, a saber, una extracción de Triton X100, que enables el aislamiento de la glicoesfingolípido enriquecido microdominio (GEM) de la fracción de los mames. Estas preparaciones GEM comparten varios componentes de proteínas con balsas caveolas y lípidos, derivados de la membrana de plasma u otras membranas intracelulares, y se proponen para funcionar como puntos de encuentro para el agrupamiento de proteínas receptoras y para las interacciones proteína-proteína ^4,15.