Análise da anatomia cerebrovascular roedor desempenha um papel importante na investigação do acidente vascular cerebral experimental. Neste contexto, a perfusão intravascular com látex corado tem sido considerada como um instrumento padrão para vários anos. No entanto, esta técnica implica limitações técnicas distintas, que minam a sua reprodutibilidade. Aqui, nós descrevemos um método simples para visualizar os vasos cerebrais, de uma forma reprodutível. A injecção de uma mistura de duas tintas pretas de carbono disponíveis comercialmente, através dos resultados do ventrículo esquerdo do miocárdio, em enchimento adequado de vasos cerebrais com visualização de alto contraste. Nós temos aplicado com sucesso esta técnica para identificar os pontos de anastomose entre territórios vasculares cerebrais de ratos com diferentes origens genéticas. Finalmente dar provas de que este método novo e simples para a coloração de navio podem ser combinados com cloreto de trifeniltetrazólio (TTC) de coloração – uma ferramenta amplamente utilizada para observar e analisar volumes do enfarte em ratos.
A estrutura anatômica dos vasos cerebrais é um factor determinante para a hemodinâmica do cérebro, bem como a gravidade da lesão após lesões isquémicas. A vasculatura cerebral dinamicamente responde a diversos estados patofisiológicos e exibe diferenças consideráveis entre estirpes e em condições de manipulações genéticas. Essencialmente, uma técnica adequada para a coloração de vasos intracranianos é essencial, a fim de estudar a patogénese da isquemia cerebral. Até recentemente, a um conjunto de diferentes técnicas tem sido utilizada para visualizar a vasculatura cerebral, incluindo a injecção de resina de baixa viscosidade, araldite F, gelatina misturada com diversos corantes 1 (isto é, vermelho carmim, India tinta) ou de látex, com 2 ou 3, sem carbono negro. Perfusão de composto de látex branco através da aorta ascendente foi primeiramente relatada por Coyle e Jokelainen 3. Maeda et al. 2 ter modificado o protocolo, acrescentando carbon tinta preta para o composto de látex para visualização melhor contraste dos vasos após a perfusão de solução salina do cérebro. No entanto, a perfusão ineficiente e enchimento insuficiente dos vasos são frequentemente experimentado devido à alta viscosidade do composto de látex 4. Assim, descrevemos uma técnica simples e de baixo custo, utilizando uma mistura de duas tintas de carbono disponíveis comercialmente pretas (CB1 e CB2) para visualizar o sistema vascular cerebral de um modo reprodutível 5. Nós mostrámos que a perfusão com CB1 CB2 + em ratos resulta na coloração de vasos cerebrais significativamente menores a uma densidade mais elevada em comparação com a perfusão de látex 5. Aqui, descrevemos nosso protocolo para identificar os pontos de anastomose entre o anterior (ACA) e artérias cerebrais médias (ACM) para estudar as variações dos vasos em ratos com diferentes origens genéticas. Finalmente, demonstrar a viabilidade da nossa técnica de um modelo de isquemia cerebral focal transiente em ratos através da combinação de CB1 +CB2 mediada por coloração com TTC vaso de coloração em vários graus de lesões isquémicas.
Perfusão de CB1 CB2 + por injecção manual pode ser realizada com sucesso por sem treino intensivo, uma vez que não envolve qualquer dispositivo específico para implicar uma certa pressão 2,3. A heterogeneidade dos resultados de perfusão em nosso protocolo também é insignificante. Só o animal um dos 16 animais não-isquêmicas e 3 de 20 animais isquêmicos mostraram perfusão incompleto. Nesses casos, a incorporação de bolhas durante a perfusão de solução salina levando a oclusão dos vasos foi …
The authors have nothing to disclose.
Gostaríamos de agradecer a Britta Kaltwasser por sua excelente assistência técnica e Mahesh Kumar Teli para organizar a preparação filmagens de vídeo.
Name of reagent | Company Name | Catalog No. |
Scribtol Schwarz (CB2) | Pelican, Germany | 221 135 |
Stempelfarbe (CB1) | Herlitz PBS AG, Germany | 10417202 |
Gedeo Latex | Pebeo, France | 13042B |