<em> In vivo</em> דיסקציה של המבוגר<em> תסיסנית</em> העצב הגחוני (VNC) הוא הוכיח. שיטה זו לנתיחה מסוים גורם נזק קטן של VNC המאפשר תיוג הבאים של נוירונים סיב ענק עם צבע פלואורסצנטי עבור הדמיה ברזולוציה גבוהה.
Abstract
כדי לנתח את המורפולוגיה axonal ו הדנדריטים של נוירונים, זה הכרחי כדי לקבל תיוג מדויק של מבנים עצביים. הכנת דוגמאות שכותרתו היטב עם מעט שום נזק לרקמות מאפשרת לנו לנתח מורפולוגיה תאים להשוות דגימות בודדות זה לזה, ולכן מאפשרת זיהוי של אנומליות מוטציה.
בשיטה לנתיחה הפגינו את מערכת העצבים נשאר בעיקר בתוך הזבוב הבוגר. דרך חתך הגב, הבטן החזה נפתחים ואת רוב האיברים הפנימיים יוסרו. רק בצד הגבי של חוט העצב הגחוני (VNC) ואת החיבור צוואר הרחם (CVC) המכיל את האקסונים גדולה של סיבי ענק (GFS) 1 חשופים, בעוד המוח המכיל את גוף התא GF ו נשאר דנדריטים 2 בראש שלם . בהכנה זו רוב העצבים של VNC צריך להישאר מחוברים השרירים שלהם.
בעקבות לנתיחה, ממלאים את תאיים של סיבים הענק (GF) עם פלורסנט לצבוע מודגם. ב CVC האקסונים GF ממוקמות על פני השטח הגבי, ולכן ניתן דמיינו בקלות תחת מיקרוסקופ עם ניגודיות ההפרש התערבות (DIC) אופטיקה. זה מאפשר הזרקה של אקסונים GF עם צבע באתר זה לתווית GF כולו כולל אקסונים ומסופי שלהם VNC. שיטה זו גורמת מכתים אמין וחזק של GFS המאפשר הנוירונים להיות צילמו מיד לאחר מילוי עם מיקרוסקופ epifluorescent. לחלופין, האות ניאון ניתן לשפר באמצעות נהלים אימונוהיסטוכימיה תקן 3 מתאים מיקרוסקופיה ברזולוציה גבוהה confocal.
Protocol
1. Dissection של חוט העצב הגחון Dissection ואת צבע המילוי של GF יכול להתבצע בטמפרטורת החדר. עבור לנתיחה כל הצעדים קר (4 ° C) מלוחים יש להשתמש כדי להאט את חילוף החומרים של התא לנוירונים להמשיך בפעילותם יותר. <li style=";text-align:r…
Discussion
מערכת העצבים יכולה להיות גזור ללא חילוץ אותו מהגוף לעוף. זו שני יתרונות, הראשון, דיסקציה גורמת נזק מועט במערכת העצבים, ושנית, עצבים ביותר להישאר מחוברים אל השרירים ואיברי חישה. ביצוע הנתיחה, כפי שתואר, מכין את המדגם עבור ישר תיוג, צבע לפנים של GFS. נוח, motoneurons postsynaptic של GFS ?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
הפרויקט מתואר נתמכה על ידי מספר גרנט R01HD050725 מהמכון הלאומי לבריאות הילד והתפתחות האדם לתייג התוכן הוא באחריות הבלעדית של הכותבים ולא בהכרח מייצגים את הדעות הרשמיות של המכון הלאומי לבריאות הילד והתפתחות האדם או המכונים הלאומיים לבריאות. אנו מודים לחברי במעבדה Godenschwege כמו גם ברברה Schreader עבור קלט שלהם כתב היד ווידאו.
Boerner, J., Godenschwege, T. A. Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection. J. Vis. Exp. (52), e3080, doi:10.3791/3080 (2011).